[发明专利]一种EHV-1血清抗体检测试剂盒及制备方法和应用

说明书

本发明公开一种EHV‑1血清抗体检测试剂盒及制备方法和应用，EHV‑1血清抗体检测试剂盒采用由塑料小盒作为外壳，预制的NC膜和滤纸构成试剂盒内芯，试剂盒外壳为长方体结构，NC膜分别包被纯化的EHV‑1 gD包涵体蛋白和猪免疫球蛋白IgG，以纯化的EHV‑1 gD包涵体蛋白做为检测抗原，猪免疫球蛋白IgG为质检蛋白，按外壳盖‑NC膜‑滤纸‑外壳底的顺序组装起来，以金标SPA为二抗，以PBS为包被液，以PBS为洗涤液，采用抗原抗体特异性结合原理用来检测马血清样品中EHV‑1抗体情况，该方法快速、可视、操作简单，适合基层人员使用，具有广泛应用价值。

技术领域

本发明涉及生物检测的技术领域，具体的说，本发明涉及一种病毒血清抗体检测方法及其应用的技术领域。

背景技术

马鼻肺炎 (Equine rhinopneumonitis，ER) 是马属动物几种高度接触传染性疾病的总称，其病原体为亲缘关系密切的两种疱疹病毒 ：马疱疹病毒 1型 (EHV-1)和马疱疹病毒4 型 (EHV-4)， EHV-1 又称马流产病毒，主要引起母马流产。在大量饲养马匹的地区中，马匹EHV-1的感染阳性率在40%左右，部分地区一半以上的马匹血清学呈阳性结果，病马和康复带毒马是本病的主要传染源。成年马临床症状较轻而幼驹症状严重，临床表现为发热、上呼吸道粘膜的卡他性炎症以及白细胞减少。 病程1周左右，幼驹可达10d 以上，妊娠毋马感染本病时易发生流产和产下弱驹，弱驹产下后多在 48h 内死亡，流产和弱驹死亡率可达 80％以上，对养马业造成严重的经济损失。

目前，补体结合方法是最常用检测EHV-1的方法。越来越多的科研人员建立了检测EHV-1的方法，如Van等（Van De Moer,Ariane,Wilks,Colin,Reginald.Antibodies specific for EHV-1 and the use of such antibodies in the detection of EHV-1[P].：WO9416093,1994-07-21.）利用病毒核衣壳蛋白特异性抗体建立检测EHV-1病毒的方法。晁群芳（晁群芳.用Dot-ELISA检测马鼻肺炎病毒抗体的研究. 新疆大学学报(自然科学版),2004,03:292-294.）用HRP标记的兔源抗EHV-1血清作为检测抗体，建立了Dot-ELISA检测方法。田志革等（田志革，郭巍，赵世华，潘佳亮，冉多良，相文华，曲娟娟.马疱疹病毒1型抗体间接ELISA检测方法的建立.中国兽医科学,2013,09:915-918.）以EHV-1 gG蛋白为抗原建立间接ELSIA诊断方法。以上方法都需要在实验室进行检测，具有检测时间长、过程繁琐等特点，更适合实验室诊断，不太适合室外普通技术人员使用，不能适用于基层单位大批量样品检测EHV-1 。

因此，通过研究一种快捷、简单、容易携带的诊断装置，提供一种可快速检测EHV-1的方法，能够解决检测时间长、过程繁琐这一难题，能够对EHV-1感染情况做出及时准确的诊断，对于生物检测领域具有广泛的现实意义。

发明内容

针对目前国内外对于EHV-1血清抗体检测客观上存在检测时间长、过程繁琐，不易在日常工作中适用的技术现状，本发明旨在于提供一种EHV-1血清抗体检测试剂盒及制备方法和应用的技术方案，通过创造性的设计一种EHV-1血清抗体检测试剂盒，能够准确快捷有效检测出EHV-1阳性血清，该方法能够快速、可视、操作简单，不需任何仪器，适合基层人员使用，具有广泛的实用性和应用价值。

本发明通过以下技术方案实现的: