[发明专利]一种培养基中菌体浓度的测定方法

权利要求书

1.一种培养基中菌体浓度的测定方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：

（1）取待测发酵液，将发酵液在45℃~50℃下保温20~40min；然后加入纤维素酶和果胶酶，以对发酵液进行酶解；

所述纤维素酶和果胶酶的总加入量为发酵液质量的2%~4%；

以质量比计，纤维素酶︰果胶酶=1:1.5~2.0，其中纤维素酶酶活≥25万U/g，果胶酶酶活≥10万U/g；

酶解温度控制在35℃~50℃，酶解时间≥1h，但不超过5h；

所述发酵液为金霉素发酵液；

所述金霉素发酵液中，金霉素发酵培养基的具体成分为，每L中：花生饼粉 20g、黄豆饼粉18g、玉米淀粉80g、酵母粉 7.0g、玉米浆12g、豆油 3g、淀粉酶0.1g、氯化钠 2.0g、硫酸铵6g、碳酸钙7.0g、硫酸镁 0.2g、磷酸二氢钾 0.3g ，pH 自然；

（2）将步骤（1）中酶解完成后的发酵液离心，弃上清，保留沉淀物；

（3）向步骤（2）的沉淀物中加入2℃~4℃的5% 体积分数的TCA 溶液，洗涤沉淀物，离心，弃上清；重复此步骤一次；

TCA溶液与步骤（1）中所取待测发酵液的体积比例为1：1~1.5；

（4）向步骤（3）的沉淀中加5% 体积分数的TCA溶液，搅拌，然后在100℃的水浴中抽提10~15min，再置于冰水中冷却，离心，取上清液，弃沉淀物；

（5）将步骤（4）所得上清液用5% TCA溶液稀释，OD₂₆₀测定吸光度，根据以下公式计算核酸浓度：

；

式中：OD₂₆₀为TCA萃取液在260nm处所测得的吸光值；N为TCA萃取液稀释的倍数。

2.如权利要求1中所述培养基中菌体浓度的测定方法，所述金霉素发酵液，具体为发酵0~120h的金霉素发酵液。