[发明专利]一种虎眼万年青的叶片种苗快速繁殖方法

权利要求书

1.一种虎眼万年青的叶片种苗快速繁殖方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)外植体的灭菌

晴天选择生长健壮，无病、虫害植株的叶片，剪去不要部份，自来水下冲洗干净，在无菌工作台上，用75％的酒精浸泡20秒，然后用0.1％升汞溶液浸泡8分钟，再用无菌水冲洗5-6次，最后用无菌纸吸去外植体表面水份；

(2)外植体锈导培养

将灭菌的叶片切为0.5×0.5cm大小的块状，接种到诱导培养基上，在温度：25-27℃，光照强度：2500-2600Lux，光照时间：每天10小时的条件下，培养60-70天，诱导出芽丛； 培养25-30天，切口处开始产生愈伤组织； 40-50天分化出小芽，60-70天形成大量芽丛； 外植体诱导分化率达90％；

(3)增殖培养

将诱导培养获得的芽丛，进行分割，每丛含2-3小芽，接种到增殖培养基上，在温度：25-27℃，光照强度：2500-2600Lux，光照时间：每天10小时的条件下，培养30天，可获得大量小苗，实现芽丛的增殖；

(4)生根培养

将增殖培养中获得的高度达1cm左右的小苗，分割为单株，接种到生根培养基上，在温度：25-27℃，光照强度：2500-2600Lux，光照时间：每天10小时的条件下，培养30-40天，得带鳞茎，高度达4-5cm的生根苗，生根率达100％；

(5)生根苗的移栽、驯化

选择生长健壮，良好根系发达的生根苗，在清水中将培养基清洗干净，不要伤根系，用75％早基托布津2000倍液浸泡3-5分钟，然后移栽到基质中，并保持60-65％的空气湿度，定植50-60天，即可进行大田移栽，其中基质的配比为：腐叶土:生红土:珍珠岩＝6:3:1；

所述步骤(2)中，灭菌的叶片切为0.5×0.5cm大小的块状，接种到诱导培养基上，诱导培养基的组分及其含量为：MS+6-BA2.5-3.0mg.L^-1+NAA0.2-0.25mg.L^-1+糖30g.L^-1+活性碳0.5-1mg.L^-1+琼脂4g.L^-1，该培养基的PH为5.6-5.8；

所述步骤(3)中，将诱培养获得的芽丛进行分割，每丛含有2-3小芽，接种到增殖培养基上，增殖培养基的组份及其含量为：MS+6-BA1.5-2.0mg.L^-1+NAA0.1-0.2mg.L^-1+糖30g.L^-1+活性炭0.5-1.0g.L^-1+琼脂4g.L^-1，该培养基的PH为5.6-5.8；

所述步骤(4)中，将增殖培养中获得的高度达1cm左右的小苗，分割为单株，接种到生根培养基上，生根培养基的组份及其含量为：

MS+NAA0.4-0.5mg.L^-1+IAA0.1-0.2mg.L^-1+糖30g.L^-1+活性炭0.5-1g.L^-1+琼脂4g.L^-1，该培养基PH值为5.6-5.8。