[发明专利]一种DC细胞的制备方法

权利要求书

1.一种DC细胞的制备方法，其步骤包括，

(1)、取出冻存的PBMC细胞在37℃的水浴中快速摇晃，使其融化；

(2)、用GT-T551无血清培养基调整单个核淋巴细胞浓度为2×10⁵-2×10⁷个/mL，然后将调整好浓度的单核淋巴细胞以2-4mL/孔加入六孔板中，贴壁1-2小时，最后吸弃六孔板的每个孔内的上层未贴壁细胞；

(3)、在六孔板的每个孔内分别加入DC培养基2-4mL，置于二氧化碳培养箱内，二氧化碳浓度为5％，温度为37％，培养45-50小时；

(4)、在六孔板的每个孔内补充加入诱导DC细胞的混合因子0.05-0.1mL后继续培养22-26小时；

(5)、在六孔板的每个孔内补充加入诱导DC成熟的因子0.08-0.16mL后再培养22-26小时。

2.根据权利要求1所述的DC细胞的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的PBMC细胞冻存于-196℃的液氮中。

3.根据权利要求1所述的DC细胞的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中，用GT-T551无血清培养基调整单个核淋巴细胞浓度为1×10⁶-3×10⁶个/mL，然后将调整好浓度的单核淋巴细胞以2-4mL/孔加入六孔板中，贴壁1.5小时，吸弃六孔板的每个孔内的上层未贴壁细胞。

4.根据权利要求1所述的DC细胞的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中，在六孔板的每个孔内分别加入DC培养基2-4mL，置于二氧化碳培养箱内，二氧化碳浓度为5％，温度为37％，培养48小时。

5.根据权利要求1所述的DC细胞的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中的DC培养基包含有GT-T551无血清培养基、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素4和CD40L。

6.根据权利要求5所述的DC细胞的制备方法，其特征在于：所述GT-T551无血清培养基、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素4和CD40L的加入量配比为1mL:950-1050U：450-550U：450-550ng。

7.根据权利要求1所述的DC细胞的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中的诱导DC细胞的混合因子的组分中,1mL诱导DC细胞的混合因子中包含950-1050U粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、450-550U白细胞介素4和950-1050U的干扰素γ。

8.根据权利要求1所述的DC细胞的制备方法，其特征在于：所述步骤(5)中，在六孔板的每个孔内补充加入诱导DC成熟的因子0.08-0.16mL后再培养24小时。

9.根据权利要求1或8所述的DC细胞的制备方法，其特征在于：所述步骤(5)中，诱导DC成熟的因子为1000U/mL肿瘤坏死因子。