[发明专利]一种检测不同土壤化学计量比小麦根际土壤微生物数量的方法

权利要求书

1.一种检测不同土壤化学计量比小麦根际土壤微生物数量的方法，其特征在于按照下述步骤进行：

（1）分别采集小麦在不同氮磷比的根际土壤，将根际土壤在20-30⁰C下风干，过2-3mm筛后溶于去离子水，得到混合液；

（2）测定土壤含水量：先将铝盒放在烘箱中于103⁰C下烘干8-10小时，取出铝盒置于下部放有部分干燥硅胶的干燥器中冷却至室温，称取铝盒重量，取10-20克新鲜土壤样品放入上述烘干后的铝盒中，称量新鲜土壤+铝盒的重量，将其放入烘箱中在103⁰C下烘干20-24小时，取出置于上述干燥器中冷却至室温，然后称量烘干土壤和铝盒的重量，计算土壤含水量；

（3）土壤悬浮液制备：称取新鲜土壤样品，置于经灭菌的250-325毫升乐扣杯中，再加入无菌水，使加入的土壤与无菌水比例为1:9g/ml，将装有土壤悬浮液的乐扣杯置于震荡器中震荡，使土壤分散，即得到10^-1土壤悬浮液；取10^-1土壤悬浮液10ml，再加入无菌水90ml，即得到10^-2土壤悬浮液；依次稀释10倍土壤悬浮液，即得到10^-3～10^-6土壤悬浮液；

（4）培养基制备：分别配置检测土壤真菌培养基、检测土壤放线菌培养基和检测土壤细菌培养基，将培养基在121⁰C下灭菌30分钟，冷却至40-50⁰C后，将培养基倒入经灭菌培养皿中制备平板培养基；

（5）接种于培养：用经灭菌的电动移液器取上述10^-2～10^-4土壤悬浮液0.1毫升，置于检测土壤真菌培养基中，用经灭菌的电动移液器取上述10^-3～10^-5土壤悬浮液0.1毫升，置于检测土壤放线菌培养基中，用经灭菌的电动移液器取上述10^-4～10^-6土壤悬浮液0.1毫升，置于检测土壤细菌培养基中，每个稀释度重复3次，用经酒精灯火焰灭菌的刮铲将培养基表面悬浮液涂抹均匀，置于28⁰C下培养3-5天（根际土壤全类真菌），28⁰C下培养5-7天（根际土壤全类放线菌），300C下培养1-2天（根际土壤全类细菌）；

（6）计数与计算：选择培养皿中生长的菌落数为20-100个菌落的稀释度进行计算，采用“单位质量干土中菌数等于菌落平均数与稀释倍数的乘积除以干土所占百分比”计算以上各微生物数量。

2.根据权利要求1所述的一种检测不同土壤化学计量比小麦根际土壤微生物数量的方法，其特征在于其中步骤（2）中采用下列公式计算土壤含水量：

土壤含水量%={1-[（烘干土壤+铝盒）（g）-铝盒（g）]/[（新鲜土壤+铝盒）（g）-铝盒（g）]}×100%。

3.根据权利要求1所述的一种检测不同土壤化学计量比小麦根际土壤微生物数量的方法，其特征在于用于检测不同土壤化学计量比小麦根际土壤微生物数量的培养基配方：

（1）检测土壤真菌培养基：磷酸二氢钾1克、七水硫酸镁0.5克、蛋白胨5克、琼脂15克、水1升，灭菌121⁰C；

（2）检测土壤放线菌培养基：可溶性淀粉20克、硝酸钾1克、氯化钠0.5克、三水磷酸氢二钾0.5克、七水硫酸镁0.5克、七水硫酸铁0.01克、琼脂20克、水1升、pH7.4～7.6，灭菌121⁰C；

（3）检测土壤细菌培养基：牛肉膏3克、蛋白胨10克、氯化钠5克、琼脂15克、水1升、pH7.4～7.6，，灭菌121⁰C。