[发明专利]以菊芋为原料的产油微生物生产微生物油脂的方法

权利要求书

1.一种以菊芋为原料的产油微生物生产微生物油脂的方法，其特征在于， 包括如下步骤：

S1、制备菊芋水解液：将菊粉与水按质量比1:1～10混合，采用3mol/L盐酸 调节pH至1～4；饱和蒸汽下水解10～40min，调节pH至中性，得到菊芋水解液；

S2、制备种子培养基：取步骤S1制得的菊芋水解液的二分之一，添加氮源 至1～20g/L，添加磷酸二氢钾至1.0g/L，添加MgSO₄·7H₂O至0.5g/L，灭菌，得 到微生物的种子培养基；

S3、菌体增殖培养：以10％(V/V)接种量接入产油微生物种子液 (OD_600nm＝1～10)于步骤S1制得的种子培养基中，在20～40℃、转速为 40～800rpm条件下，通气培养12～96h，离心分离，收集菌体，即为增殖后的产 油微生物菌体；

S4、制备产油培养基：将步骤S1制得的菊芋水解液剩余的二分之一进行脱 磷处理，得到碳元素与磷元素摩尔比率大于70的除磷产油培养基；

或将步骤S1制得的菊芋水解液剩余的二分之一进行脱硫处理，得到碳元素 与硫元素摩尔比率大于150的除硫产油培养基；

S5、菌体油脂积累培养：将步骤S3制得的增殖后的产油微生物菌体接种于 步骤S4制得的除磷产油培养基或除硫产油培养基中；在20～40℃、pH值为 3.0～8.0、转速为40～800rpm条件下培养48～168h，收集菌体，即为含油的产油 微生物菌体，于105℃烘干至恒重，得到产油微生物干菌体；

S6、提取产油微生物油脂：提取步骤S5得到的产油微生物干菌体中的油 脂，得到产油微生物油脂。

2.根据权利要求1所述以菊芋为原料的产油微生物生产微生物油脂的方法， 其特征在于，步骤S1所述菊粉的粒度为50～200目。

3.根据权利要求1所述以菊芋为原料的产油微生物生产微生物油脂的方法， 其特征在于，步骤S2所述氮源为酵母提取物、蛋白胨、NH₄NO₃、(NH₄)₂SO₄中 的一种或几种组合。

4.根据权利要求1所述以菊芋为原料的产油微生物生产微生物油脂的方法， 其特征在于，步骤S3所述产油微生物为所述产油微生物为经发酵培养后、微生 物胞内油脂含量大于其细胞干重20wt％的真核或原核微生物；包括产油细菌、 产油真菌、产油霉菌、产油微藻。

5.根据权利要求4所述以菊芋为原料的产油微生物生产微生物油脂的方法， 其特征在于，

所述产油细菌为Arthrobacter属、Rhodococcus属或Mycobacterium属；

所述产油真菌为Rhodosporidium属、Cryptococcuscur属、Yarrowia属、 Rhodotorula属、Rhizopus属、Lipomyces属、Trichosporon属、Mortierella属、 Mucor属或Cunninghamella属；

所述产油霉菌为Mortierella属、Cunninghamella属、Mucor属或Aspergillus 属；

所述产油微藻为Crypthecodinium属、Botryococcus属、Chlorella属、 Nannochloropsis属、Haliphthoros属或Schizochytrium属。

6.根据权利要求1所述以菊芋为原料的产油微生物生产微生物油脂的方法， 其特征在于，

步骤S4所述脱磷处理采用化学沉淀法；

步骤S4所述脱硫处理采用化学沉淀法。

7.根据权利要求1所述以菊芋为原料的产油微生物生产微生物油脂的方法， 其特征在于，步骤S6采用酸热-有机溶剂法提取步骤S5得到的产油微生物干菌 体中的油脂。

8.根据权利要求7所述以菊芋为原料的产油微生物生产微生物油脂的方法， 其特征在于，步骤S6具体操作为：

S61、向步骤S5得到的产油微生物干菌体中按每克所述产油微生物干菌体 10ml浓度为4mol/L盐酸的比例加入盐酸，78℃水浴处理1.5h；

S62、冷却后加入2倍体积的体积比为1:1的氯仿/甲醇溶剂萃取，收集有机 相；

S63、将步骤S62剩余的水相以等体积氯仿再萃取一次，收集有机相；

S64、将步骤S62及步骤S63收集的有机相合并，加等体积0.1wt％的氯化 钠溶液，混匀，离心，收集有机相；

S65、将步骤S64收集的有机相用无水硫酸钠干燥，减压蒸发除去溶剂，得 到产油微生物油脂。