[发明专利]一种玉米赤霉烯酮免疫亲和柱及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种制备玉米赤霉烯酮免疫亲和柱的方法，该方法包括下列步骤：

a)称取CNBractiveSepharose4B柱料1g，加入1mMHCl溶液10ml，浸泡30min，使 之溶胀；

b)然后以3000～8000r/min转速离心2～10min分离柱料，用0.1MPH9.0CB缓冲液洗涤 溶胀的基质3～5次，每次加入缓冲液10ml，以5000r/min离心10min分离柱料；

c)向溶胀好的柱料中加入抗体30mg，再加入0.1MPH9.0CB缓冲液10ml，于37℃条件 下150r/min震荡反应1h；

d)离心分离柱料，用0.1MPH8.3NaHCO₃缓冲液洗柱料3～5次，10ml/次；

e)加入含0.5MNaCl的0.1MPH8.0的Tris-HCl溶液10ml于结合有抗体的柱料中，4℃ 过夜或者37℃，150r/min反应2h封闭未结合位点；

f)用含0.5MNaCl的0.1MPH4.0的醋酸钠洗脱液与含0.5MNaCl的0.1MPH8.0的 Tris-HCl溶液交替洗涤3～5遍，最终用含0.5MNaCl的0.1MPH8.0的Tris-HCl洗脱液10ml 复溶；

g)按每支1ml抗体结合凝胶溶液进行装柱，加20％的乙醇保存液，4～8℃，可保存一年 以上。

2.根据权利要求1所述方法制备的玉米赤霉烯酮免疫亲和柱，其特征在于，该免疫亲和 柱包括偶联有玉米赤霉烯酮特异性抗体的CNBractiveSepharose4B与装载其的塑料管，以及 保存液。

3.权利要求2所述的玉米赤霉烯酮免疫亲和柱，其特征在于，其中所述的玉米赤霉烯酮 特异性抗体为单克隆抗体。

4.权利要求2所述的玉米赤霉烯酮免疫亲和柱的使用方法，该方法包括以下步骤：

a)将亲和柱从2～8℃环境中取出，回温至室温，将免疫亲和柱连接于10ml的注射器下；

b)1ml的亲和柱产品需将柱体上方塞子取下，剪掉塞子的下部，再插回亲和柱上连接注 射器，3ml的亲和柱产品使用转接头进行连接；

c)准确吸取5ml待测液加入到注射器中，使用注射器控制待测液流速为1～2秒每滴通过 亲和柱，用5ml去离子水淋洗亲和柱2次，使用注射器控制流速为0.5～1秒每滴，待液体通 过后，排干亲和柱内的液体；

d)准确吸取1ml甲醇，进行洗脱操作，使用注射器控制流速为2～3秒每滴，收集全部洗 脱液，用于分析。

5.权利要求2所述的玉米赤霉烯酮免疫亲和柱的用途，其特征在于，所述用途为提取谷 物样品以及饲料样品中的玉米赤霉烯酮残留。

6.权利要求5所述的用途，其特征在于，所述的谷物样品为：玉米、大豆、花生、小麦、 大麦、大米。