[发明专利]一种醋酸亮丙瑞林的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种醋酸亮丙瑞林的制备方法，具体为一种利用反相高效液相色谱 法，对固相合成的亮丙瑞林粗品进行等度和梯度洗脱，并对其进行转盐的制备方法。

背景技术

前列腺癌在全球范围内十分常见，世界卫生组织国际癌症研究机构于2012统计， 该年全球新诊断的前列腺癌患者为110万，约占新增癌症病例总数的15%，即成为全球范围 内男性第二常见的癌症。美国癌症学会（ACS）发布的《2015年癌症统计》报告预计，2015年美 国的新发癌症病例为1658370人，其中26%的男性病例为前列腺癌，是男性好发癌症中的首 位。与欧美等发达国家相比，中国的前列腺癌发病率较低，但却在快速上升中。据统计，中国 前列腺癌的发病率在近二十年间增长了超过10倍，成为男性恶性肿瘤的第6位。中国抗癌协 会泌尿男性生殖系肿瘤专业委员会的数据显示，截止至去年年底，中国前列腺癌每年新发 病例达330万人。其中经济发达地区尤为严重，2009年的统计数据显示，城市地区的发病率 比农村地区高四倍以上，而北京、上海、广州的发病率分别为19.3/10万、32.23/10万、 17.57/10万。

多肽、蛋白质是生命体内一类具有特定生物活性，对机体生命活动发挥重要调节 功能的活性物质。随着生物技术和多肽合成技术的发展，这些生物活性分子也大量的可以 利用人工的方法获得，并进行鉴定、分离和纯化。醋酸亮丙瑞林是一种常用的激素类抗恶性 肿瘤药物，是促性腺素释放激素(LHRH)类似物，含有9个氨基酸的多肽，其促黄体生成激素 （LH）释放活性约为LH-RH的15倍，它的抑制垂体-性腺系统功能的作用也强于LH-RH。醋酸亮 丙瑞林是高活性的LH-RH类似物，由于它对蛋白分解酶的抵抗力和对LH-RH受体的亲和力都 比LH-RH强，所以能有效地抑制垂体-性腺系统的功能。临床上具有很大的应用价值。醋酸亮 丙瑞林从1989年批准上市以来，用于治疗子宫内膜异位症、子宫肌瘤、中枢性性早熟症、晚 期前列腺癌的效果已经得到公认。其毒副作用小，已经成为治疗晚期前列腺癌的首选药物。

醋酸亮丙瑞林可以通过人工固相合成的方法得到，并利用反相高效液相色谱对其 进行分离纯化。高效液相色谱经过30多年的快速发展，已经取得了长足的进步，其中反相高 效液相色谱因其良好的选择性，具有分离效果好、分辨率高、回收率高的特点，在多肽的分 离纯化中备受青睐，其应用范围不断扩大，具有广阔前景。利用反相高效液相色谱对多肽进 行分离纯化时，反向色谱柱填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键 合相，通常使用十八烷基硅烷键合硅胶。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常以水、缓 冲液为水相，甲醇、乙腈、异丙醇等为有机相，水相和有机相组成混合试剂进行二元梯度洗 脱。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱 上有更强的保留。

传统的转盐方法是利用玻璃柱或者聚乙烯柱里面装填阴阳离子树脂，利用离子交 换的原理实现多肽产品的转盐过程。另外利用传统阴阳离子交换原理，对多肽产品进行转 盐，步骤1）在调整多肽产品液体的PH后，上样挂柱2）冲洗样品3）利用酸碱调整冲洗液的PH 后将多肽产品冲洗下来，在此过程中，每一个环节都要取少许的流出液进行HPLC检测，确认 冲洗干净后，方可进行下一步工作。所以此方法，工作流程多，时间消耗大，而且会产生大量 的废液，更重要的是最后收集的多肽产品合格液体积大，不利于下面的浓缩和冻干工作。另 外需要购置仪器设备和阴阳离子填料，还需另外安排实验场地和人员，耗费了大量的人力 物力。

2009年11月上海丽珠制药有限公司获得注射用醋酸亮丙瑞林微球药品批文。2011 年8月美国FDA批注了Abbott公司每3个月注射1剂用醋酸亮丙瑞林。2012年2月杭州中肽生 化有限公司醋酸亮丙瑞林产品零缺陷通过了美国FDA现场审查，成为国内通过FDA检查的唯 一多肽制造商。国内外许多制药公司也在积极研发优化醋酸亮丙瑞林微球工艺，使其缓释 周期更长。另外国内外不乏关于亮丙瑞林的文献，但是少有利用反相高效液相色谱法对亮 丙瑞林进行粗纯、精纯、转盐方法的相关文献。

发明内容