[发明专利]一种采用双重免疫标记监测昆虫迁飞规律的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物保护技术领域，具体涉及一种采用双重免疫标记监测昆虫迁飞规律的方法，即采用酶联免疫吸附测定方法检测带有不同标记蛋白的迁飞型昆虫，以此来明确当地迁飞昆虫的迁出规律以及迁入种群的再迁飞规律，进而指导农业迁飞性害虫的预测预报及其防控。

背景技术

昆虫迁飞是指在一定的季节里，在生长发育的某个特定阶段，成群或分散的，有规律的从一个发生地飞到另一个地区的适应性现象。迁飞性昆虫多呈现跨省乃至跨国远距离迁飞的景象，在农林牧区常常突发成灾，进而对经济生产造成严重威胁。例如，非洲的沙漠蝗(Schistocerca gregaria)、澳大利亚的疫蝗(Chortoicetes terminifera)和中国的东亚飞蝗(Locusta migratoria manilensis)，都是臭名昭著的具有大区域暴发性和毁灭性的迁飞性害虫。中国地处东亚季风区，特殊的地理气候条件使中国农作物的主要害虫都是南北往返迁飞数千公里，屡屡“小虫成大灾”。因此研究昆虫的迁飞规律，对于防治迁飞型昆虫显的尤为重要。

当前主要运用雷达昆虫学和轨迹分析技术来研究昆虫的迁飞规律。前者主要通过毫米波或厘米波昆虫雷达观测迁飞昆虫的空中迁飞行为规律来开展；后者则主要通过气象数据(风向、风速和降雨等)分析，并采用回推的方式来计算迁飞型昆虫的来源，即虫源概率区域。然而有关迁飞种群的迁出规律以及迁入种群的再迁飞规律等至今仍未具体明确。

发明内容

本发明的目的是提供一种采用双重免疫标记监测昆虫迁飞规律的方法，该方法为能明确当地种群的迁出规律以及迁入种群的再迁飞规律的行之有效的监测技术，进而指导农业迁飞性害虫的预测预报及其防控。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种采用双重免疫标记监测昆虫迁飞规律的方法，包括以下步骤：

(1)迁飞型昆虫的选择：选择一种或多种迁飞型昆虫；

(2)蛋白标记物的选择：选择蛋清蛋白标记物为第一种蛋白标记物，脱脂奶粉标记物为第二种蛋白标记物；

(3)目的昆虫当地种群的发生情况调查：结合寄主作物的生长期，捕获目的昆虫，并结合大田调查以明确目的昆虫当地种群的发生数量；

(4)第一种蛋白标记物的喷洒以及目的昆虫捕获：在目的昆虫当地种群高密度期喷洒第一种蛋白标记物，24小时后分别捕获居留型和迁出型的目的昆虫，-20℃下保存；

(5)第二种蛋白标记物的喷洒以及目的昆虫捕获：于目的昆虫迁入高峰期均匀喷洒第二种蛋白标记物，24小时后分别捕获居留型和迁出型的目的昆虫，-20℃下保存；

(6)目的昆虫当地种群的迁出行为规律及迁入种群的再迁飞行为规律研究：通过酶联免疫吸附法分别检测步骤(4)和步骤(5)所捕获目的昆虫携带的标记蛋白种类及数量，以明确当地种群的迁出行为规律和迁入种群的再迁飞规律；

Ⅰ在调查目的昆虫当地种群时只用蛋清蛋白进行标记，捕获的迁出型目的昆虫中呈蛋清蛋白阳性的即为有迁飞行为的当地种群：

当地种群迁飞比例＝迁出型蛋清蛋白阳性种群数量/(迁出型蛋清蛋白阳性种群数量+居留型蛋清蛋白阳性种群数量)；

Ⅱ在调查迁入种群中利用蛋清蛋白和脱脂奶粉双重蛋白标记，捕获的迁出型目的昆虫中只有呈脱脂奶粉阳性的即为有再迁飞行为的迁入种群：

迁入种群再迁飞比例＝(迁出型脱脂奶粉阳性种群数量-迁出型双重阳性种群数量)/(迁出型脱脂奶粉阳性种群数量+居留型脱脂奶粉阳性种群数量-迁出型双重阳性种群数量-居留型双重阳性种群数量)。

所述第一蛋白标记物的配制方法为：称取体积比为1：99的蛋清蛋白和水混合均匀。

所述第二蛋白标记物的配制方法为：称取质量体积比(g：mL)为1：99的脱脂奶粉和水混合均匀。

所述第一蛋白标记物和第一蛋白标记物的喷洒量为250～300L/公顷。

所述的居留型目的昆虫通过大田普查的方式进行捕获，所述的迁出型目的昆虫通过诱虫灯诱捕的方式进行捕获。大田普查捕获目的昆虫时一般是采用电动吸虫器进行。

所述酶联免疫吸附法为本领域的常规的技术方法。

步骤(6)中采用酶联免疫吸附法检测脱脂奶粉标记蛋白的详细过程为：

(1)捕获的目的昆虫分别放在微量离心管中，每一个微量离心管中加入750μl TBS缓冲溶液，置于恒温摇床27℃，100rpm，清洗1h，取上清液移至新微量离心管；

(2)获得的上清液即为抗原样品，取80μl抗原样品加入到微量滴定板中，每个样品重复三次，然后在4℃冰箱孵育1h；