[发明专利]杏鲍菇原始母种的制作方法

权利要求书

1.一种杏鲍菇原始母种的制作方法，其特征在于，先是进行杏鲍菇原始母种的培养，再进行杏鲍菇原始母种的提纯；包括以下步骤，

杏鲍菇原始母种的培养：

A、挑选种菇：从疏过蕾1-2天的育菇房，挑选多个六成熟，有本品种典型性状，健壮、美观、无病虫害的菇子10-20个作为种菇，采摘的时候戴上无菌手套，采摘后放到无菌塑料袋里面，并封严实袋口；

B、准备用具：把种菇、经过检测无菌的PDA培养皿、无菌水及全部操作用具灭菌后放入消过毒的超净工作台里面；

C、冲洗种菇：在无菌、正压的情况下，戴上无菌手套用无菌水把种菇逐个冲洗干净，分开放到超净工作台上，开紫外灯消毒30分钟后，再开洁净正压风，把种菇表面的水分吹干、备用；

D、接种：戴上无菌手套，把杏鲍菇一分为二的切开，并在菌盖和菌柄处用无菌手术刀切取菌种块，用无菌的接种钩，转入无菌的PDA培养皿中心，每个种菇取两块，转接到两个无菌的培养皿之中；

E、封口装袋：用封口膜把接完种的PDA培养皿边缘封口并标记，再装入密封的无菌袋；

F、恒温培养：消毒培养箱，将装袋后的PDA培养皿，放到恒温培养箱里，温度调到25±0.5℃，进行黑暗、避光无风或弱风培养4-8天；

G、筛选提纯用种：培养期间，每天观察培养皿的生长参数，对于1个种菇转接的两个培养皿，都表现最佳的生长参数，则选为提纯的原始母种；

杏鲍菇原始母种提纯的具体步骤如下：

H、制作PDA培养皿，皿内的培养基清晰、偏干、无杂质、整个培养基厚度均匀一致，控制在3.0±0.5mm；

I、切杏鲍菇菌丝尖端：将把长满培养皿1/2的杏鲍菇菌种、全部操作器具放到经过紫外灭菌的超净工作台或生物安全柜里面，进行紫外或紫外加臭氧机避光灭菌20-40min；关闭紫外灯和臭氧机，开正压风，用无菌刀片快速切杏鲍菇菌丝尖端1±0.5mm，一个培养皿切10-12个这种长度的尖端，切完后盖上培养皿盖子；

J、分离出带有菌丝尖端的培养基块：把切分过的菌种培养皿，用很薄的无菌刀片，分离出切好的菌丝尖端，同时要切下菌丝尖端所依附的培养基块并分离出来，二者合称为菌种块；

K、分皿：把经过检测无菌的培养皿、杏鲍菇菌种块、全部操作器具在超净工作台或生物安全柜里面进行第二次紫外或紫外加臭氧机灭菌30-40min，戴上无菌手套，用接种钩把分离出的菌种块，钩取移动到空白培养皿的中央，一个菌种块放一个空白培养皿；

L、封口并标记：把转接有菌种的培养皿封口并贴好标签，放到密封的无菌塑料袋中；

M、培养：把培养皿放到26±1℃的恒温培养箱里面，进行黑暗、避光、无风或弱风培养8-12天；

N、提纯复壮：每天观察记录菌丝的各项生长指标，当菌丝长满培养皿1/2-2/3的时候，选出优势的2个培养皿作为下次提纯复壮的出发菌种，按照上面方法，对菌丝尖端切取，重复上述H至N步骤3-8次；

O、选种：对经过提纯，表现非常优良的菌丝进行镜检、病毒检测、出菇试验，对三个指标都表现达标、出菇试验指标最优的菌种选作原始母种保藏。

2.根据权利要求1所述的杏鲍菇原始母种的制作方法，其特征在于，在“B、准备用具”步骤中的全部操作用具包括灭过菌的手术刀、接种钩、无菌烧杯、酒精灯、酒精棉球、无菌手套、火机。

3.根据权利要求1所述的杏鲍菇原始母种的制作方法，其特征在于，所述“G、筛选提纯用种”步骤中，所述生长参数包括培养皿的污染情况、菌种块萌发的快慢、长满培养皿时间、菌丝浓密度、菌丝光泽度、菌丝粗壮度、菌丝生长速度、菌丝边缘整齐程度、菌丝伸展度、菌丝生长势。

4.根据权利要求1所述的杏鲍菇原始母种的制作方法，其特征在于，“I、切杏鲍菇菌丝尖端”步骤中，全部操作器具包括酒精灯、体视 显微镜、灭过菌的手术刀、无菌手套、火机、酒精棉球；“K、分皿”步骤中全部操作器具包括酒精灯、酒精棉球、无菌手套、接种钩。

5.根据权利要求1所述的杏鲍菇原始母种的制作方法，其特征在于，“N、提纯复壮”步骤中，各项生长指标包括菌丝萌发的时间、菌丝长速、菌丝健壮度、菌丝光亮度、菌丝伸展度、菌丝粗细程度、菌丝边缘整齐度，菌丝整体长势。