[发明专利]一种提高草莓植株抗旱能力的方法

权利要求书

1.rty基因在提高草莓抗旱能力中的应用，其特征在于，所述rty基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一种提高草莓植株抗旱能力的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将草莓的组培苗浸入携带rty基因和选择标记基因的农杆菌菌液中侵染3-6分钟；

(2)将组培苗移至再生培养基上培养；

(3)将组培苗移至分化培养基上培养，获得抗性芽；

(4)抗性芽在生根培养基上生根后炼苗、移栽，得到转基因草莓植株；

(5)采用PCR法对含有目标基因rty的阳性转基因植株进行检测；

其中，所述rty基因同权利要求1中所述。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中草莓组培苗的制备方法为：采草莓匍匐茎上的芽，用水冲洗后，放入0.1％的升汞中处理4-6分钟，然后用无菌水冲洗3-6次，吸干芽上的残留水分后，将芽接种到初代培养基上，培养10-12天后，芽开始萌发，待长成2-4cm大的组培苗，将组培苗移至继代培养基上培养生长30-35天，取伸展叶片剪成叶盘，准备侵染。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)中携带rty基因和选择标记基因的农杆菌菌液的制备方法为：

1)构建植物表达载体pBI121-rty：将rty基因克隆到T-easy载体上，构建载体T-rty，然后用内切酶Xba I和Sac I分别双酶切载体T-rty和pBI121，将T-rty酶切后回收的小片段与pBI121酶切后回收的大片段，在连接酶的作用下构建得到植物表达载体pBI121-rty；

2)农杆菌转化：用pBI121-rty转化根癌农杆菌LBA4404，28±2℃下在含100mg·L^-1卡那霉素的LB液体培养基中培养15-16小时后，用MS液体培养基继续培养2-4小时，待菌液OD₆₀₀为0.3-0.5时用于侵染；

其中，初代培养基为：MS基本培养基中添加30g·L^-1蔗糖、6.5g·L^-1琼脂粉、1.0mg·L^-16-苄基腺嘌呤和0.2mg·L^-1吲哚丁酸，pH5.6；

继代培养基为：MS基本培养基中添加30g·L^-1蔗糖、6.5g·L^-1琼脂粉、0.2mg·L^-1 6-苄基腺嘌呤和0.1mg·L^-1吲哚丁酸，pH5.6。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)中将侵染后的组培苗去除多余菌液，接种至再生培养基上，28±2℃暗培养2-3天；

再生培养基为：MS基本培养基中添加30g·L^-1蔗糖、6.5g·L^-1琼脂粉、3.0mg·L^-1 6-苄基腺嘌呤和0.1mg·L^-1 2,4-二氯苯氧乙酸，pH5.6。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)中将经过再生培养后的组培苗转接在分化培养基上，28±2℃暗培养10-12天，然后在25±2℃、光周期16小时光照/8小时黑暗、光照强度25-35μmol·m^-2·s^-1下培养30-40天，获得抗性芽；

分化培养基为：MS基本培养基中添加30g·L^-1蔗糖、6.5g·L^-1琼脂粉、400mg·L^-1头孢霉素、7.5mg·L^-1卡那霉素、3.0mg·L^-1 6-苄基腺嘌呤和0.1mg·L^-1 2,4-二氯苯氧乙酸，pH5.6。