[发明专利]大豆苷元的制备方法

说明书

大豆苷元的制备方法，涉及一种大豆苷元的制备方法。本发明是要解决现有转化方法大豆苷元的转化率，纯度低的问题。方法：一、原料热处理；二、发酵；三、耦合酶解发酵；四、纯化干燥，制得大豆苷元产品。本发明方法是集物理加热、酶解、微生物发酵于一体的复合技术，设备、工艺条件较简单，易于实现，适合工业化生产。而且酶利用率高，产生的废液污染小，易处理。本发明方法的大豆苷元转化率可达到60％～76.8％，制备的产品大豆苷元的纯度可达35％～47.3％。本发明用于制备大豆苷元。

技术领域

本发明涉及一种大豆苷元的制备方法。

背景技术

大豆异黄酮(Soybean Isoflavones，SIF)是大豆中具有重要生理活性的多酚类黄酮化合物，母体结构如下：

大豆异黄酮在天然大豆中的主要存在方式是以3-苯并吡喃为母核，并结合了糖基的糖苷，种类共12种。

大豆素(Daidzein)、黄豆黄素(Glycitein)和染料木素(Genistein)，这3种为游离型，总称为大豆苷元；还有就是与其对应的9种结合型糖苷：葡萄糖苷、乙酰基葡萄糖苷和丙二酰基葡萄糖苷各3种。在天然的大豆异黄酮产品中，易被人体吸收的活性功能成分是游离型苷元，此部分仅占大豆异黄酮总量的2％～3％，其余是不易被人体吸收的结合型糖苷，占97％～98％。结合型中的乙酰基葡萄糖苷和丙二酰基葡萄糖苷不稳定，加热后会发生转化，使游离型苷元含量增加。

天然大豆苷元的获得主要有两种途径：一是从大豆中直接提取，二是由结合型大豆异黄酮转化而来。与转化相关的技术主要有酸碱水解法、酶水解法，最主要的酶有β-葡萄糖苷酶、葡萄糖酸酶、α-半乳糖苷酶、乳糖酶、真菌乳糖酶和乳糖酶F等；微生物降解法，对产β-葡萄糖苷酶的菌种研究主要集中在酵母、曲霉、木霉以及细菌。综合目前的相关研究，存在的问题是，大豆苷元的提取率和转化率都比较低，市售的大豆异黄酮产品总黄酮含量在30％～80％，而且其中苷元含量也很低。

发明内容

本发明是要解决现有转化方法大豆苷元的转化率，纯度低的问题，提供一种大豆苷元的制备方法。

本发明大豆苷元的制备方法，按以下步骤进行：

一、原料热处理：对原料进行预处理，预处理的具体方法为炒制，炒制时间为103s，炒制温度为130～140℃；所述原料为大豆异黄酮；

二、发酵：

将步骤一炒制过的原料加入到BHI液体培养中，然后接入河生肠杆菌LJ-G1菌液，接种量为5％，发酵条件为：初始pH为7.8～8.2，温度为38～40℃，时间为38～40h；

三、耦合酶解发酵：

将液态黑曲霉β-葡萄糖苷酶稀释8000倍后，与质量分数2％的海藻酸钠缓冲溶液混合均匀，然后用注射器缓慢的滴入到质量分数2％的壳聚糖溶液和质量分数2％的CaCl2溶液组成的混合液中，形成微胶囊，然后将其放于4℃硬化2h，再用真空抽滤机进行抽滤，移至体积分数0.2％的戊二醛中，于40～45℃交联1～1.5h，用蒸馏水洗涤3遍，冲去未结合的游离酶以及固定化酶表面的戊二醛，得到海藻酸钠-壳聚糖-β-葡萄糖苷酶-固定化酶；

待步骤二的发酵时间剩余3～4h时，添加固定化酶于发酵液中，进行耦合酶解发酵，初始pH为6.5～7.5、酶解时间为3～4h，得酶解发酵液；

四、纯化干燥：

将酶解发酵液于3000～3500r/min离心30～40min，取上清液用活性炭进行脱色30～40min，每50mL上清液加入3g活性炭，再经大孔树脂纯化，得到大豆苷元甲醇溶液，旋转蒸发除去溶剂，干燥，制得大豆苷元产品。

步骤一中所述大豆异黄酮购买自石家庄健禾生物科技有限公司。