[发明专利]精制冠心片特征图谱的构建和6种成分的测定方法

权利要求书

1.一种精制冠心片特征图谱的构建方法，其特征是包括以下步骤：

(1)首先取①芍药苷，迷迭香酸，丹酚酸B，藁本内酯，隐丹参酮，丹参酮IIA对照品，②13批精制冠心片样品，③按《中国药典》2015年版一部收载的精制冠心片处方比例及工艺制备的分别缺少丹参，赤芍，川芎，红花的4种阴性样品，即先后制备对照品溶液，供试品溶液和阴性样品溶液，分别精密吸取对照品溶液，供试品溶液和阴性样品溶液各0.5μL，注入液相色谱仪中，按照设定的色谱条件进行测定，检测40分钟，选取记录的前35分钟的色谱图，并以国家药典委员会的中药色谱指纹图谱相似度评价软件系统进行计算后即生成精制冠心片的特征图谱；

(2)上述对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品17.57mg，迷迭香酸对照品96.16mg，丹酚酸B对照品93.80mg，藁本内酯对照品34.26mg，隐丹参酮对照品18.67mg，丹参酮IIA对照品24.26mg，分别置于100mL量瓶中，加甲醇定容至100ml，制成对照品浓溶液，分别精密量取对照品浓溶液各3mL，置于50mL量瓶中，加甲醇定容至50mL，制成每1mL含芍药苷10.162μg，迷迭香酸56.888μg，丹酚酸B52.734μg，藁本内酯20.556μg，隐丹参酮11.202μg，丹参酮IIA14.396μg的混合溶液作为对照品溶液；

(3)上述供试品溶液的制备：取精制冠心片样品10片，除去包衣，精密称定，研细，精密称定粉末0.3g，加入80％甲醇10mL，超声处理30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，制成供试品溶液；

(4)上述阴性样品溶液的制备：按《中国药典》2015年版一部收载的精制冠心片处方比例及工艺制备分别缺少丹参，赤芍，川芎，红花的4种阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备4种阴性样品溶液；

其中的共有特征峰的标定是通过对照品溶液，供试品溶液和阴性样品溶液的比较，得出供试品溶液图谱中9个共有特征峰的归属，1号峰为芍药苷峰，属于赤芍；2号峰为迷迭香酸峰，属于丹参，3号峰为未知成分峰，属于川芎，4号峰为丹酚酸B峰，属于丹参，5号峰为未知成分峰，属于红花；6号峰为未知成分峰，属于川芎，7号峰为藁本内酯峰，属于川芎，8号峰为隐丹参酮峰，属于丹参，9号峰为丹参酮ⅡA峰，属于丹参。

2.如权利要求1所述的精制冠心片特征图谱的构建方法，其特征是上述高效液相色谱仪的设定条件：色谱柱：DikmaEndevaorsilC₁₈2.1×100mm，1.8μm；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱0→13min，95％B→75％B，13→30min，75％B→20％B，30→35min，20％B，35→40min，95％B，流速为每分钟0.2ml；柱温为30℃，检测波长为270nm；其中理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于10000。

3.如权利要求1所述的精制冠心片特征图谱的构建方法，其特征是上述的超声处理条件为功率300W，频率40KHz。

4.权利要求1构建的精制冠心片特征图谱应用于精制冠心片的真伪鉴别和质量优劣的判定。

5.权利要求4所述的应用方法：只要分别精密吸取对照品溶液，供试品溶液各0.5μL，注入液相色谱仪中，按照上述设定的色谱条件进行测定，检测40分钟，选取记录的前35分钟的色谱图即可进行判定；

结果判定如下：供试品溶液图谱中应有9个特征峰，其中有6个峰应分别与相应的对照品峰保留时间相同，与丹酚酸B对照品相应的峰为S峰，计算特征峰1～9号与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5％之内，规定值为：0.61，0.92，0.94，1.00，1.11，1.48，1.60，1.73，1.90，如供试品溶液图谱完全满足上述判定条件，则可判定检测样品为合格样品；否则可判定检测样品为不合格样品。

6.精制冠心片6种成分含量的测定方法：其特征是分别精密吸取上述的对照品溶液、供试品溶液各0.5μL，注入液相色谱仪中，按照设定的色谱条件进行测定，用已有的外标法直接计算出精制冠心片中6种成分的含量：含量测定芍药苷检测波长为230nm；迷迭香酸、丹酚酸B检测波长为288nm；藁本内酯检测波长为321nm；隐丹参酮、丹参酮IIA检测波长为270nm。