[发明专利]降钙素原单克隆抗体对及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一对降钙素原单克隆抗体对，其检测抗体重链可变区核苷酸和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示，轻链可变区核苷酸和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示；捕获抗体重链可变区核苷酸和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示，轻链可变区核苷酸和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11所示。本发明还公开了上述抗体对的制备方法及在PCT检测中的应用。本发明通过建立ELISA检测平台筛选PCT最佳配对抗体，不仅减少了后期纯化工作，而且提高了PCT体外诊断试剂的质量和细菌感染诊断的准确性。

技术领域

本发明涉及生物领域，特别是涉及降钙素原(PCT)单克隆抗体对、其制备方法及其在降钙素原检测中的应用。

背景技术

降钙素原(PCT)是由116个氨基酸组成的激素原，是一种分子量约为13KD的糖蛋白，在正常生理情况下，由甲状腺C细胞分泌产生，在体内半衰期为25～30个小时。PCT由神经内分泌细胞(包括甲状腺、肺和胰腺组织的C细胞)表达，经酶切分解为(未成熟)降钙素、羧基端肽和氨基端肽。健康人血液中的PCT浓度非常低，小于0.05ng/ml。在炎症刺激特别是细菌感染/脓毒血症状态下，机体各个组织、多种细胞类型均可产生PCT，并释放进入血液循环系统。因此通过测量人体血清中PCT的含量，可以鉴别细菌感染程度。

动物模型试验显示机体发生脓毒血症时，多组织均能表达PCT。脓毒血症患者体内的PCT只含有114个氨基酸，缺少氨基末端的Ala-Pro。PCT水平升高见于细菌性脓毒血症，尤其是重症脓毒血症和感染性休克。PCT可作为脓毒血症的预后指标，也是急性重症胰腺炎及其主要并发症的可靠指标。2012年9月发表的《降钙素原PCT急诊临床应用的专家共识》指出：脓毒症患者的PCT水平明显高于非脓毒症患者。且PCT升高对细菌感染导致的脓毒症特异性很高，可作为诊断脓毒症和鉴别严重细菌感染的生物标志物。同时，与单纯的临床检测标准相比，PCT检测可显著提高SIRS/脓毒症诊断的敏感性(97％)和特异性(78％)。把PCT加入诊断标准后，诊断准确率从0.77提高到0.94。

对于社区获得性呼吸道感染和空调诱导性肺炎患者，PCT可作为抗生素选择以及疗效判断的指标，因此发明降钙素原(PCT)体外诊断试剂配对抗体原料对于临床诊断具有重大的社会价值和经济价值。

发明内容

本发明要解决的技术问题之一是提供一对降钙素原单克隆抗体对，它可以提高降钙素原体外检测的准确性。

为解决上述技术问题，本发明的降钙素原单克隆抗体对，包括检测抗体和捕获抗体；所述检测抗体的重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，氨基酸序列如SEQ IDNO.5所示，轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示；所述捕获抗体的重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示。

本发明要解决的技术问题之二是提供上述降钙素原单克隆抗体对的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明的降钙素原单克隆抗体对制备方法，步骤包括：

1)制备降钙素原重组抗原；

2)制备小鼠降钙素原单克隆抗体；

3)高通量筛选降钙素原单克隆检测抗体和捕获抗体对。

较佳的，步骤1)，采用293F真核表达系统获得降钙素原重组抗原。

较佳的，步骤3)，采用酶联免疫化学发光检测方法筛选降钙素原单克隆抗体对。

本发明要解决的技术问题之三是提供上述单克隆抗体对在降钙素原检测中的应用。