[发明专利]用于检测胃癌相关代谢小分子的液质联用模型及制备方法

权利要求书

1.一种用于检测胃癌相关代谢小分子标志物的液质联用模型，其特征在于利 用高效液相色谱-质谱联用仪测定胃癌患者和健康人唾液样本的代谢小分子，并筛 选出相应的胃癌相关代谢小分子标志物，其中所述的胃癌相关代谢小分子标志物包 括：脯氨酸、β-氨基异丁酸、谷氨酸、羟脯氨酸、谷氨酰胺、γ-氨基丁酸、 鹅肌肽和肌肽。

2.如权利要求1所述的用于检测胃癌相关代谢小分子标志物的液质联用模 型，其特征在于，高效液相色谱条件为：选用C18色谱柱，流动相A为0.01％ 七氟丁酸与0.1％甲酸水溶液；流动相B为0.01％七氟丁酸与0.1％甲酸乙腈溶 液，进行梯度洗脱，均为体积百分比；流速为0.8mL/min，柱温为50℃。

3.如权利要求2所述的用于检测胃癌相关代谢小分子标志物的液质联用模 型，其特征在于，所述梯度洗脱的条件为：0min(98％流动相A+2％流动相B)， 9.5min(76％流动相A+24％流动相B)，11.0min(20％流动相A+80％流动相B)， 16.0min(98％流动相A+2％流动相B)，25.0min(98％流动相A+2％流动相B)， 均为体积百分比。

4.如权利要求1～3任一项所述的用于检测胃癌相关代谢小分子标志物的液 质联用模型，其特征在于，质谱条件为：电喷雾离子源，正离子扫描，MRM扫 描方式，气帘气为137.9kPa，碰撞气为中等，喷雾气为413.7kPa，辅助加热气 为413.7kPa，电压为1500V，去簇电压为30V，人口电压为10V，碰撞能为30V， 出口电压为5V。

5.一种如权利要求1～4任一项所述的用于检测胃癌相关代谢小分子标志物 的液质联用模型的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、收集多例胃癌患者唾液样本和健康人的唾液样本分别作为病例组 和对照组，进行低温冷冻备用；

步骤二、对所述唾液样本进行解冻，加入aTRAQ^TMKitPhysiological衍生 化试剂进行预处理；

步骤三、对预处理过的两组唾液样本进行高效液相色谱-质谱检测，并收集 检测到的代谢小分子的检测数据；

步骤四、对于高效液相色谱-质谱检测到的代谢小分子，用Mann-WhitneyU test方法进行差异性检验，得到16种在病例组和对照组中存在明显差异的代谢 小分子；

步骤五、对所述存在明显差异的代谢小分子使用百分比差异度进行评估， 得到百分比差异度得分最大的代谢小分子脯氨酸；

步骤六、以对照组唾液样本中脯氨酸浓度的均值作为聚类分割值，将全部 样本分为2个子类，脯氨酸浓度小于所述聚类分割值的归为一个子类命名为 M1，脯氨酸浓度大于等于所述聚类分割值的归为另一个子类命名为M2，并通 过ROC曲线比较聚类前后的曲线线下面积；

步骤七、使用mRMR的方法，分别对所述M1子类和所述M2子类中的代 谢小分子进行打分，根据打分值进行排序，得到小分子与胃癌相关度的顺序； 按照小分子与胃癌相关度的顺序，从相关度大的开始，先选择1个小分子，利 用最近邻方法进行胃癌判断和“刀切法”得到胃癌判断的准确率；选择n个小 分子，利用最近邻方法再次进行胃癌判断和“刀切法”得到新的准确率，直到 选择所有的16个小分子为止；当准确率最大时，得到建模需要的小分子数目 及其胃癌判断的准确率；其中，n<＝16；结果是得到了羟脯氨酸、谷氨酰胺、 γ-氨基丁酸、鹅肌肽、肌肽、β-氨基异丁酸、谷氨酸和脯氨酸，作为胃癌相 关代谢小分子标志物，建立用于检测胃癌相关代谢小分子标志物的液质联用模 型。

6.如权利要求5所述的用于检测胃癌相关代谢小分子标志物的液质联用模 型的制备方法，其特征在于，所述步骤一中收集到的唾液样本经离心去上皮细 胞后以上清液作为唾液待测样本进行低温冻存备用。