[发明专利]黄曲霉毒素B1的检测方法及检测试剂盒

权利要求书

1.一种黄曲霉毒素B1的检测方法，其特征是，该方法包括如下步骤：

（A）黄曲霉毒素B1核酸适体Apt与单链信号探针ssDNA通过下划线部分互补碱基杂交，形成杂交链；

（B）使该杂交链与待测样品作用，当待测样品中有黄曲霉毒素B1存在时，杂交链中黄曲霉毒素B1核酸适体与黄曲霉毒素B1发生特异性反应释放出单链信号探针ssDNA；

（C）为了消除杂交链的干扰，以杂交链为模板，进行DNA扩增，使杂交链成双链DNA，然后用外切酶，将双链DNA水解成单核苷酸而除去双链DNA，留下单链信号探针ssDNA；

（D）黄曲霉毒素B1核酸适体-黄曲霉毒素B1结合体不能诱导银离子还原生成近红外荧光的银纳米簇，待测体系中的单链信号探针ssDNA诱导银离子还原成近红外荧光银纳米簇，检测体系的荧光强度，从而测定待测样品中的黄曲霉毒素B1的含量；

所述DNA扩增体系包括缓冲溶液，dNTP和Phi29 DNA聚合酶;所述缓冲溶液由Tris-HCl，MgCl₂和(NH₄)₂SO₄ 组成；所述外切酶为Exo III核酸外切酶；

所述黄曲霉毒素B1核酸适体为5’-AAAAAGTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACA-3’；

所述的单链信号探针ssDNA为5’-CCCCCCACACCCGATCCCCCCTGTGGGCCTAGCG-3’。

2.一种检测黄曲霉毒素B1的试剂盒，其特征是，其中包括： 黄曲霉毒素B1核酸适体，单链信号探针ssDNA，DNA扩增体系，核酸外切酶，银离子还原检测体系；所述黄曲霉毒素B1核酸适体为5’-AAAAAGTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACA-3’；

所述的单链信号探针DNA为5’-CCCCCCACACCCGATCCCCCCTGTGGGCCTAGCG-3’；

所述DNA扩增体系包括缓冲溶液、dNTP和Phi29 DNA 聚合酶; 所述缓冲溶液由Tris-HCl、MgCl₂ 和(NH₄ )₂SO₄ 组成；

所述核酸外切酶为Exo III核酸外切酶。

3.根据权利要求2所述的检测黄曲霉毒素B1的试剂盒，其特征是，所述的银离子还原检测体系中还原剂为硼氢化物。

4.根据权利要求3所述的检测黄曲霉毒素B1的试剂盒，其特征是，所述硼氢化物为硼氢化钠。