[发明专利]发酵法高密度培养小球藻生产工艺

权利要求书

1.一种培养小球藻的生产工艺，其特征在于，依次包括以下步骤：

a选取优质小球藻藻种并将其活化，接种培养，使小球藻种子液的浓度在8～11g/L；

b异样培养，包括四个阶段：

b₁第一阶段：将步骤a培养至生长对数期的小球藻种子液，接入150L的种子罐中进行 异样培养，其中，150L的种子罐中培养基组成如下：

葡萄糖：30-60g/L，硫酸镁：0.5-1.6g/L，柠檬酸钙：0.1-0.5g/L，磷酸钠：1.0-2.0g/L， 磷酸氢二钾：0.3-0.8g/L，硫酸亚铁：0.05-0.1g/L，乙二胺四乙酸二钠：0.3-0.6g/L，尿 素：3-8g/L，微量元素和水；

培养控制条件：

温度：30-35℃，罐压：0.03-0.08MPa，风量：1.0-2.0vvm，DO≥20％，pH：5.5-7.5；

b₂第二阶段：待第一阶段小球藻种子液培养24～32h、碳源耗尽溶氧反弹且小球藻种子 液干重在20～25g/L、pH在6～7培养正常时，将其接种至1.5方罐中异样培养；反之，重 新进入第一阶段培养；

该阶段的培养基组成与第一阶段种子罐中的培养基成分相同，并且，培养控制条件也与 第一阶段培养控制条件相同；

b₃第三阶段：待二阶段小球藻种子液培养24～32h、碳源耗尽溶氧反弹且小球藻种子液 干重在20～25g/L、pH在6～7培养正常时，将其接种至17方罐中异样培养；反之，重新进 入第二阶段培养；

该阶段的培养基组成与第一阶段种子罐中的培养基成分相同，并且，培养控制条件也与 第一阶段培养控制条件相同；

b₄第四阶段：待待三阶段小球藻种子液培养24～32h、碳源耗尽溶氧反弹且小球藻种子 液干重在20～25g/L、pH在6～7培养正常时，将其接种至50方罐中异样培养；反之，重新 进入第三阶段培养；

所述50方罐中的培养基分为基础培养基和流加培养基，所述流加培养基分为四次加入；

基础培养基的组成如下：

葡萄糖：50-60g/L，硫酸镁：0.8-1.6g/L，柠檬酸钙：0.2-0.5g/L，磷酸钠：1.0-2.0g/L， 磷酸氢二钾：0.4-0.8g/L，硫酸亚铁：0.08-0.1g/L，乙二胺四乙酸二钠：0.3-0.6g/L，尿 素：3-8g/L，微量元素和水；

流加培养基的组成如下：

葡萄糖：200g/L，硫酸镁：4g/L，柠檬酸钙：1.5g/L，磷酸钠：5g/L，磷酸氢二钾：2g/L， 硫酸亚铁：0.4g/L，乙二胺四乙酸二钠：2g/L，尿素：15g/L，微量元素和水；

c诱导培养，

待第四阶段培养至碳源耗尽、溶氧反弹时，进行诱导培养，诱导温度为30～35℃，罐压： 0.04～0.06MPa，风量：1.5～2.0vvm，尿素含量≥4g/L。

2.根据权利要求1所述的培养小球藻的生产工艺，其特征在于：步骤b₁中，微量元素配 方为：硫酸锰：4.0-8mg/L，硫酸锌：0.5-0.8mg/L，钼酸：0.1-0.5mg/L，硫酸铜：0.1-0.8mg/L， 硼酸：10-15mg/L。

3.根据权利要求1所述的培养小球藻的生产工艺，其特征在于：流加培养基的具体加入 方式为：当发酵培养20～25h，且碳源耗尽、溶氧反弹、pH在6～7.5时，第一次加入流加培 养基；当发酵培养32～38h，且碳源耗尽、溶氧反弹，pH在6～7.5时，第二次加入流加培养 基；当发酵培养43～47h，且碳源耗尽、溶氧反弹，pH在6～7.5时，第三次加入流加培养 基；当发酵培养53～57h，且碳源耗尽、溶氧反弹，pH在6～7.5时，第四次加入流加培养 基。

4.根据权利要求1所述的培养小球藻的生产工艺，其特征在于，步骤b₄中流加培养基中 微量元素的配方为：硫酸锰：25mg/L，硫酸锌：2.5mg/L，钼酸：1.5mg/L，硫酸铜：2.5mg/L， 硼酸：50mg/L。