[发明专利]一种RGD修饰树状大分子稳定的功能化金纳米星/siRNA复合物的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于诊疗一体化纳米材料的制备领域，特别涉及一种RGD修饰树状大分子稳定的功能化金纳米星/siRNA复合物的制备方法。

背景技术

近年来，纳米材料由于其在基因/药物传递、分子影像和靶向治疗方面的潜在应用，受到越来越广泛的关注。尤其是特殊形貌的金纳米颗粒，因为具有良好的化学稳定性、生物相容性、催化活性以及独特的光学性质，广泛应用在生物传感器、光热治疗和分子影像等领域。鉴于金纳米材料表面易被化疗药物和其他功能性基团修饰，所以常被作为多模态治疗和诊疗一体化的明星纳米平台。

金纳米星作为特殊形貌的金纳米颗粒的一种，已被验证可以成功应用于光热治疗、化学催化和分子影像等方面。前期的工作中，在CTAB存在的条件下，合成了金包覆氧化铁星形核壳结构的复合纳米颗粒，并成功应用于MR/CT双模态成像和肿瘤的光热治疗。(沈明武，李静超，胡勇，韦平，史向阳。一种金包覆氧化铁星形核壳结构纳米颗粒的制备及其成像和热疗的应用。申请号：CN201410333885.7，申请日期：2014-07-14)。但由于CTAB的存在，使得后期纯化过程较为繁琐。

前期工作已经证明，RGD对α_vβ₃整合素高表达的U87MG细胞具有很好的靶向作用(沈明武，胡勇，李静超，韦平，史向阳。一种RGD修饰的超小型超顺磁氧化铁纳米颗粒的制备方法。申请号：CN201410604468.1，申请日期：2014-10-31)。且功能化的树状大分子既作为金纳米星的稳定剂又可作为基因传递的载体，可以显著提高基因传递效率(史向阳，孔令丹。一种功能化聚酰胺-胺树状大分子及其纳米复合物用于基因转染的方法。中国发明专利，申请号：CN201310291576.3，申请日期：2013-07-11)。

检索国内外文献，尚没有发现关于RGD靶向树状大分子稳定的功能化金纳米星的制备及其用于CT成像和光热与基因联合治疗的相关报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种RGD修饰树状大分子稳定的功能化金纳米星/siRNA复合物的制备方法，该方法工艺简单，反应条件温和，易于操作；制备得到的多功能化的金纳米星具有良好的单分散性、胶体稳定性和生物相容性，且所用的合成原料均为环境友好型材料，具有产业化实施的前景。

本发明的一种RGD修饰树状大分子稳定的功能化金纳米星/siRNA复合物的制备方法，包括：

(1)将柠檬酸三钠溶于超纯水中，然后加入到煮沸的氯金酸溶液中，煮沸至溶液颜色由无色变为酒红色，终止反应，冷却至室温，得到柠檬酸钠稳定的金纳米颗粒；其中，柠檬酸三钠与氯金酸溶液的体积比为1.5:10；

(2)将步骤(1)中的柠檬酸钠稳定的金纳米颗粒加入到氯金酸溶液中，避光搅拌，加入AgNO₃和抗坏血酸AA，搅拌反应2～4h，纯化，冷冻干燥，得到金纳米星AuNSs；其中，HAuCl₄、AA、AgNO₃的摩尔比为500：1：40～60；

(3)将巯基乙酸甲酯MTG逐滴加入到第三代聚酰胺-胺树状大分子G3.NH₂的超纯水溶液中，60℃～80℃恒温反应12～48h，透析，冷冻干燥，得到部分巯基封端的聚酰胺-胺三代树状大分子G3.NH₂-SH；其中，MTG与G3.NH₂的摩尔比为18～20:1；

(4)将步骤(3)中的G3.NH₂-SH溶于超纯水中，逐滴加入到步骤(2)中的AuNSs的水溶液中，搅拌12～24h，离心，洗涤，冷冻干燥，得到树状大分子稳定的金纳米星G3-AuNSs；其中，G3.NH₂-SH与AuNSs的质量比为5～10:1；

(5)将6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯6-M与COOH-PEG-NH₂混合于DMSO溶液中，搅拌反应8-10小时，得到COOH-PEG-MAL；然后再将充分溶解于DMSO中的巯基封端的RGD即SH-RGD逐滴加入到COOH-PEG-MAL的DMSO溶液中，搅拌反应1～2天，透析，冷冻干燥，即得到COOH-PEG-RGD；其中，SH-RGD：6-M：COOH-PEG-NH₂的摩尔比为1:1～1.2:1～1.2；