[发明专利]检测检疫性黄单胞菌的方法及其专用引物

说明书

本发明公开了一种检测检疫性黄单胞菌的方法及其专用引物。本发明所提供的引物，由引物对甲和引物对乙组成；所述引物对甲由引物XHpaAT‑F和引物XHpaAT‑R组成；所述引物对乙由引物XHpaAH‑F和引物XHpaAH‑R组成；所述引物XHpaAT‑F、所述引物XHpaAT‑R、所述引物XHpaAH‑F和所述引物XHpaAH‑R的核苷酸序列依次如序列表中的序列1、序列2、序列3和序列4所示。实验证明，依据本发明提供的检测检疫性黄单胞菌的方法及其专用引物可简单、快速、有效的鉴定待测菌株是否为检疫性黄单胞菌，准确性为100％，对黄单胞菌属内不同种的检疫性病原菌的检测或鉴定具有重要的应用。

技术领域

本发明涉及微生物领域，尤其涉及检测检疫性黄单胞菌的方法及其专用引物。

背景技术

黄单胞菌属属于细菌域(Bacteria)，变形菌门(Proteobacteria)，γ-变形菌纲(Gammaproteobacteria)，黄单胞菌目(Xanthomonadales)，黄单胞菌科(Xanthomonadaceae)，是革兰氏阴性细菌。该属中大部分成员是植物病原菌，引起的植物病害遍布全世界，至少可以侵染124种单子叶植物，268种双子叶植物，给农业生产造成重大损失。目前已确认是不同的植物病原菌的黄单胞菌超过100种。

检疫性黄单胞菌是指黄单胞菌属中被我国定义为进境植物检疫性有害生物的植物病原菌，如胡椒叶斑病菌(Xanthomonas axonopodis pv.betlicola)、柑橘溃疡病菌(Xanthomonas axonopodis pv.citri)、木薯细菌性萎蔫病菌(Xanthomonas axonopodispv.manihotis)、甘蔗流胶病菌(Xanthomonas axonopodis pv.vasculorum)、芒果黑斑病菌(Xanthomonas campestris pv.mangiferaeindicae)、香蕉细菌性萎蔫病菌(Xanthomonascampestris pv.musacearum)、木薯细菌性叶斑病菌(Xanthomonas cassavae)、草莓角斑病菌(Xanthomonas fragariae)、风信子黄腐病菌(Xanthomonas hyacinthi)、水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)和水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzaepv.oryzicola)。这些植物病原菌所引起的病害危害十分严重，因此加强对其的检测鉴定技术研究具有重要意义，但由于这些病原菌属于同一属，具有较高的同源性，因此依据分离培养、菌落形态、生理生化反应、血清学反应等传统手段进行鉴定，一般耗时较长且操作复杂，灵敏度较低，不能满足口岸植物检疫的快速通关要求；同时现有的分子检测方法，包括常规PCR、实时荧光PCR等也很难有效的将这些检疫性黄单胞菌同时区分开来。因此，亟需一种简单、快速、有效的区分鉴定黄单胞菌属内不同种的检疫性病原菌的检测或鉴定手段。

发明内容

本发明要解决的技术问题是如何快速、有效的鉴定检疫性病原菌。

为解决上述问题，本发明首先提供了一种成套引物。

本发明提供的成套引物，可由引物对甲和引物对乙组成；所述引物对甲可由引物XHpaAT-F和引物XHpaAT-R组成；所述引物对乙可由引物XHpaAH-F和引物XHpaAH-R组成；

所述引物XHpaAT-F是如下A1)或A2)中的任一种单链DNA：

A1)序列表的序列1所示的单链DNA；

A2)与A1)限定的单链DNA片段具有85％以上的同一性的单链DNA片段；

所述引物XHpaAT-R是如下B1)或B2)中的任一种单链DNA：

B1)序列表的序列2所示的单链DNA；

B2)与B1)限定的单链DNA片段具有85％以上的同一性的单链DNA片段；