[发明专利]用于配制酸稳定口服细菌疫苗的方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于配制酸稳定口服细菌疫苗(acid stabilized oral bacterial vaccine)的方法，更特别地是全细胞的灭活细菌与酸稳定rCTB(重组霍乱毒素B，recombinant cholera toxin B)的组合，其导致产生针对由多种细菌(例如霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、肠产毒性大肠杆菌(Escherichia coli)(Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC))引起之腹泻的协同保护。本发明还涉及制备剂型的新方法，其导致产生容易且高度可接受的施用方式。

背景技术

腹泻仍然是对于公众健康的全球性威胁。腹泻的主要原因包括某些细菌、病毒或寄生虫、食物不耐受等。据估计，每年可归因于霍乱(Cholera)的死亡率为28000至142000例死亡，且发病率为140至430万例(Cholera 2013：Weekly epidemiological record.WHO 2014，89，345-356)。

通常来说，大量的水被分泌到小肠腔中，但是该水的较大百分比在到达大肠之前被高效地吸收。当水分泌到小肠腔中超过其吸收时的病症被称为腹泻。在该病症中，人会遭受腹部痛性痉挛(abdominal cramp)、胃气胀(bloating)、恶心和稀水样便(loose-watery stool)。在大多数情况下，腹泻体征和症状通常持续数天。但有时腹泻可持续数周，且在这些情况下，这是严重疾病的体征，并需要及早治疗。

腹泻的主要原因包括影响人的消化系统和肠运动的某些细菌、病毒或寄生虫、食物不耐受等。肠产毒性大肠杆菌(以下称为“ETEC”)感染是旅行者腹泻(travellers’diarrhoea)的首要原因，也是欠发达国家(尤其是儿童中)腹泻疾病的主要原因。ETEC通过被动物或人粪便污染的食物或水传播。在暴露于称为志贺菌属(Shigella)的另一些细菌后引起志贺菌病(Shigellosis disease)，其包括腹泻(通常为血性)、发热和胃痛性痉挛(stomach cramp)。尽管霍乱弧菌和其他肠产毒性细菌(例如ETEC)通过完全相同的机制产生分泌性腹泻(secretory diarrhea)，但霍乱是严重得多的腹泻形式。

霍乱是由霍乱弧菌分泌的肠毒素引起的潜在流行性的且危及生命的分泌性腹泻，其特征在于大量、大体积的水样便，常伴有呕吐，并导致低血容量性休克(hypovolemic shock)和酸中毒(acidosis)，并且如果人未接受治疗则会致死。虽然有许多可以产生霍乱症状的霍乱弧菌(V.cholera)血清组，但在99％的病例中，发现最严重的霍乱症状由O1血清组和O139血清组引起。

由霍乱引起的腹泻在居住在卫生条件差且环境管理不善之地区的人群中最为常见。发展中国家和欠发达国家面临更大的风险。典型的风险地区包括城郊贫民窟，其中基础设施不可得，且其中没有满足清洁的水和卫生设施的最低需求。

导致腹泻和霍乱及其他肠感染的因素目前尚不能控制，并且在这种情况下，疫苗会发挥重要作用。在过去几年中，已经尝试开发来自全霍乱弧菌灭活细胞或来自活减毒细胞的不同类型的口服霍乱疫苗(Oral Cholera Vaccine，下文中称为“OCV”)。世界卫生组织(WHO)推荐使用OCV来预防霍乱流行。

有许多应对该主题的专利和非专利公开内容。在Stertman，L.2004，题为“Starch Microparticles as an Oral Vaccine Adjuvant with emphasis on the Differentiation of the Immune response”的来自药学院的论文317.56 pp Uppsala.ISBN 91-554-6101-8的文章中的非专利公开内容公开了可通过对颗粒进行肠溶包衣(这可使其通过胃肠道转运而幸免)来改善rCTB的口服活性，但它们并未表明肠溶包衣的rCTB和霍乱弧菌细菌全细胞的协同活性。另一篇题为“Travel Medicine and Infectious Disease”第11卷，第2期，103-109页，2013年3-4月的非专利文献公开了全细胞肠溶包衣的作用。关于动物研究的实验数据表明片剂的包衣过程不影响霍乱弧菌灭活细胞的免疫原性。此外，在肠溶包衣或未包衣片剂引起的免疫应答中没有观察到差异。因此，该非专利文献教导偏离本发明。