[发明专利]确定溶剂校正曲线的方法

说明书

发明领域

本发明涉及用于调节有效(active)和参考检测表面之间的主体信号失配的方法。更具体地说，本发明涉及用于建立溶剂校正曲线以及使用所述曲线从分析物的传感图获得校正的传感图或校正的报告点的方法。本发明还涉及用于执行所述方法的步骤的分析系统和计算机程序产品。

发明背景

能够实时监测分子相互作用的分析传感器系统(即，无标签系统)正受到越来越多的关注。这些系统经常基于光学生物传感器，且通常被称作相互作用分析传感器或生物特异性相互作用分析传感器。代表性生物传感器系统是由GE Healthcare Life Sciences销售的Biacore®仪器，其使用表面等离子体共振(surface plasmon resonance，SPR)来检测样品中的分子与固定在传感表面上的分子结构之间的相互作用。使用Biacore®系统，有可能在不使用标记的情况下实时确定样品中的具体分子的存在和浓度以及附加的相互作用参数，例如分子相互作用的缔合速率常数和解离速率常数。该装置和理论背景在文献(参见例如，Jonsson，U.等人，BioTechniques 11：620-627(1991))中充分描述。通常，该技术涉及将配体固定到传感器芯片(流动池)的特殊光学传感器表面，使传感器芯片与含有感兴趣的分析物的样品流接触，和随后测量由配体和分析物之间的结合引起的传感器芯片的表面光学特性中的变化。有关SPR的更多细节，还参考美国专利No. 5,313,264、美国专利No. 5,573,956和美国专利No. 5,641,640。

当用弱疏水的分析物分子运行测定时，可能需要在流动缓冲液和样品中包含有机溶剂。对于较小的有机分子分析物(80-1000Da)，通常使用有机溶剂例如2-5%二甲基亚砜(DMSO)。许多这些应用取决于有效表面和参考表面之间的基准减法(reference subtraction)，以便获得足够的数据品质。然而，取决于固定在有效表面上的配体的量，主体信号(来自流动缓冲液和样品中的折射率的差异)不能被基准减法完全猝灭。这被添加到来自分析物结合的响应中，并且由于失配也随着移液误差而变化，其可以从显著的正值跨到负值。取决于报告点读数，这可能对测定中的数据品质而言是重要的。

然而，这可以通过测量在参考物中参考误差与主体响应的函数且随后通过该函数调节每个样品来校正，即溶剂校正。当进行溶剂校正时，用户必须制备具有代表性主体响应的许多溶液(根据Biacore推荐的程序，8种)。为了建立校正曲线，将这些溶液注射到每一对参考-有效检测表面上。由于程序在整个运行中重复至少一次，并且由于不存在多次使用相同位置的方式，板占用率和用户工作量是显著的。

需要使溶剂校正过程简单和自动化。

发明概述

本发明涉及用于建立溶剂校正曲线以及使用所述曲线从分析物的传感图获得校正传感图或校正报告点的方法。

在一方面，它提供了用于建立溶剂校正曲线的方法，其包括：

a. 提供包含高浓度的有机溶剂的第一溶液和包含低浓度的相同有机溶剂的第二溶液；

b. 在集成微流体盒(IFC)的流动通道中以预定比例在线混合所述两种溶液，所述流动通道包含具有未固定有配体或类似物的光学传感器表面的流动池；

c. 从步骤(b)的光学传感器表面获得所述混合溶液的传感图，所述传感图包含所述传感图的稳定部分处的报告点；

d. 在集成微流体盒(IFC)的另一个流动通道中以如步骤(b)中的相同预定比例在线混合所述两种溶液，所述流动通道包含具有固定有配体或类似物的光学传感器表面的流动池；

e. 从步骤(d)的光学传感器表面获得所述混合溶液的传感图，所述传感图包含所述传感图的稳定部分处的报告点；

f. 以所述两种溶液的不同预定比例重复步骤(b)和(c)各n次；和

g. 使用所述报告点建立溶剂校正曲线；

其中n为至少3。

在另一方面，它提供了用于获得分析物的校正响应的方法，其包括：

a. 在包括含有用于分析物的固定配偶体(partners)的光学传感器表面的流动池中生成具有分析物的溶液的传感图；

b. 在具有不含有用于分析物的固定配偶体的光学传感器表面的相同或另一个流动池中生成溶液的传感图；

c. 通过以下方式获得校正的响应，首先对于各个信号，从(a)的信号中减去(b)的信号以生成修改的传感图，随后根据通过本发明的某些实施方案获得的校正曲线调节所述修改的传感图的信号或来自所述传感图的报告点。