[发明专利]一种加压微提取设备和加压微提取方法及其应用

权利要求书

1.一种红花的加压微提取方法，具体操作为：

I.填装提取柱：红花药材粉碎，过60～80目筛，取1.0mg装于去除了填料的预柱芯中并用惰性材料硅藻土4.0～6.0mg进行填充，然后装入预柱套中置于液相色谱仪柱温箱中；

II.加压微提取：柱温箱温度为55～65℃，以体积百分浓度25％的甲醇水溶液或体积百分浓度0.01％的甲酸水溶液为提取溶剂，开启液相高压泵，流速3～5mL/min，提取时间20～120秒；收集流出液。

2.根据权利要求1所述的红花的加压微提取方法，其特征在于，以体积浓度25％的甲醇水溶液为提取溶剂，流速5mL/min，提取时间27秒。

3.一种红花的加压微提取和离线检测羟基红花黄色素A的方法，具体操作为：

I.填装提取柱：红花药材粉碎，过60～80目筛，取1.0mg装于去除了填料的预柱芯中并用惰性材料硅藻土4.0～6.0mg进行填充，然后装入预柱套中置于液相色谱仪柱温箱中；

II.加压微提取：柱温箱温度为55～65℃，以体积百分浓度25％的甲醇水溶液为提取溶剂，开启液相高压泵，流速3～5mL/min，提取时间20～120秒；收集流出液，混合均匀，即得到红花提取液；

III.取步骤II得到的红花提取液5μL，注入高效液相色谱仪中检测羟基红花黄色素A的含量。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤III中的色谱条件为：

色谱柱：UPLC HSS T3，100mm×2.1mm,1.8μm；

柱温：35℃；

流动相：体积百分比浓度0.01％的甲酸水为A相，体积百分比浓度0.01％的甲酸乙腈为B相，按照如下程序进行梯度洗脱：

0-5min,体积百分比0％→23％B，余量为A；

5-8min,体积百分比23％→100％B，余量为A；

流速：0.4mL/min；

检测器：光电二极管阵列检测器，检测波长为403nm。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤III还包括将对照品溶液5μL注入高效液相色谱仪中，其中所述对照品溶液通过如下方法制备：

称取羟基红花黄色素A标准品，加25％甲醇溶解配制成浓度为6.925mg/mL的储备溶液；取所述储备液用25％甲醇溶液稀释至羟基红花黄色素A浓度为35μg/mL的标准液，即得。

6.一种红花的加压微提取和在线检测的方法，具体的操作为：

I.填装提取柱：红花药材粉碎，过60～80目筛，取1.0mg装于去除了填料的预柱芯中并用惰性材料硅藻土4.0～6.0mg进行填充，然后装入预柱套中置于液相色谱仪柱温箱中；

II.连接加压微提取设备和检测系统：所述提取柱、液相高压泵、分析色谱柱连接到六通阀上，所述分析色谱柱和检测器连接；

III.加压微提取：切换六通阀，使所述液相高压泵、提取柱和分析色谱柱顺序串联；柱温箱温度为50～60℃，以体积百分浓度0.01％的甲酸水溶液为提取溶剂，开启液相高压泵，流速1mL/min，提取时间3分钟；

IV.在线检测：提取结束后，立即切换六通阀使所述液相高压泵和分析色谱柱直接连通，进行洗脱和检测。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤I中，硅藻土的填充量为6.0mg。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤III中，柱温箱温度为55℃。