[发明专利]一种鉴定中华绒螯蟹不同家系所用的引物及其鉴定方法

权利要求书

1.一种鉴定中华绒螯蟹不同家系所用的引物，其特征在于，该引物包括10对微卫星引物，具体如下：

2.一种中华绒螯蟹不同家系的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)从待鉴别的中华绒螯蟹腿部肌肉提取DNA；

(2)以步骤(1)得到的DNA为模板，用权利要求1所述的10对引物进行PCR扩增，得到扩增产物；

(3)对步骤(2)得到的扩增产物使用聚丙烯酰胺胶进行电泳和银染；

(4)对步骤(3)的银染结果通过遗传分析软件进行分析，测量每个个体之间的遗传距离，根据遗传距离绘制UPGMA聚类分析图，根据聚类结果区分不同中华绒螯蟹家系的个体。

3.根据权利要求2所述的中华绒螯蟹不同家系的鉴定方法，其特征在于，步骤(2)中PCR扩增的反应体系为15ul：10×PCR Buffer 1.5ul，2.5mmol/LdNTP 0.5ul，MgCl₂ 1.5ul，上下游引物各0.5ul，Taq酶0.2ul，DNA模板2ul，超纯水8.3ul。

4.根据权利要求2所述的中华绒螯蟹不同家系的鉴定方法，其特征在于，步骤(2)中PCR扩增反应程序为：94℃预变性3分钟；然后94℃变性30秒，62℃退火30秒，72℃延伸30秒，共35个循环；最后72℃延伸10分钟，4℃保存。

5.根据权利要求2所述的中华绒螯蟹不同家系的鉴定方法，其特征在于，步骤(3)中PCR产物用12％的非变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳和银染。

6.根据权利要求2所述的中华绒螯蟹不同家系的鉴定方法，其特征在于，步骤(4)中所述的遗传分析软件为population软件。