[发明专利]巨细胞病毒IgG抗体亲和力检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析领域，尤其是涉及一种巨细胞病毒IgG抗体亲和力检测试剂 盒。

背景技术

人巨细胞病毒(humanCytomegalovirus,HCMV)又称细胞包涵体病毒，属于疱疹 病毒β亚科，是人类疱疹病毒组中最大的一种病毒。本病毒对宿主或培养细胞有高度的种特 异性，人巨细胞病毒只能感染人、及在人纤维细胞中增殖，是婴儿宫内、产道和母乳感染，以 及因免疫抑制剂、器官和骨髓移植、艾滋病等所致免疫低下患者罹患严重感染的重要病原。

巨细胞病毒是新生儿先天性致畸的重要病原微生物之一，它对胎儿的危害比风疹 病毒要大，最易引起胎儿、新生儿、婴儿的急性、慢性感染及迟发后遗症。孕妇的原发或新的 复发感染均可引起新生儿宫内或围产期感染，当孕妇患有巨细胞活动感染时，病毒可通过 胎盘进入胎儿体内引起先天性感染。孕妇的原发感染对胎儿的危害比复发感染严重，它不 仅可引起先天性感染，而且后遗症较多且严重，原发性孕期感染CMV的胎儿80%可出现智力 低下，视力受损，听力丧失等症状，特别是引起婴儿的巨细胞包涵体病（CI），患儿可多个系 统、多个器官受损，其病死率达10％~20％（CI的特点是网状内皮系统和中枢神经系统受 侵）。我国孕期妇女原发感染CMV的比例为3%~4%，而原发感染导致胎儿受到影响的机率为 50%，IgG亲和力检测可以帮助区分是否为原发感染或新的复发感染，因为低亲和力的IgG 抗体出现在感然后的前几个月，随着时间的推移，抗体逐渐成熟为高亲和力的抗体，高亲和 力的IgG抗体可以排除发生在4个月以内的感染，这对于在怀孕的前3个月检测出IgM抗体阳 性的孕妇，可以看出感染是否发生在怀孕前。

目前，巨细胞病毒IgG抗体亲和力检测有中和抗体法和变性剂法。中和抗体法是利 用抗原溶液将样本中的高亲和力抗体中和掉，剩余的是低亲和力抗体，亲和力指数=1-中和 结果/未中和结果，根据亲和力指数判定结果。中和抗体法的亲和力指数受到加入的中和抗 原量和样本中抗体浓度的影响，为得到准确的结果需将抗体浓度稀释到一定的范围内进行 检测，这种方法适合于全自动检测系统，对于手工操作则显得比较麻烦，且该检测产品属国 外进口产品，价格昂贵。变性剂法是利用尿素或二乙胺等变性剂处理结合在固相载体上的 抗体，低亲和力的抗体很容易被洗脱掉，高亲和力的抗体仍旧结合在固相载体上。亲和力指 数=变性处理的结果/未变性处理的结果，根据亲和力指数判定结果。变性法比较简单，但对 于全自动检测系统来说，高浓度的变性剂容易造成交叉污染，故比较适合于手工操作，但截 至目前，尚没有基于ELISA平台变性剂法检测巨细胞病毒IgG抗体亲和力的试剂盒批准上 市。

发明内容

本发明的目的在于提供一种适合手工操作且操作简便的巨细胞病毒IgG抗体亲和 力检测试剂盒。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的巨细胞病毒IgG抗体亲和力检测试剂盒，包括微孔板、酶结合物工作液、 样品稀释液、解离缓冲液、对照缓冲液、高亲和力质控品、低亲和力质控品；所述微孔板上包 被有巨细胞病毒抗原；所述酶结合物工作液中的抗体为辣根过氧化物酶标记的鼠抗人IgG 抗体；所述解离缓冲液由PBST溶液中加入8Mol/L尿素配制而成。

所述试剂盒中还包括底物液、显色液和终止液。

所述微孔板上包被的巨细胞病毒抗原为巨细胞基因重组抗原pp150（UL32）和gp52 （UL44）按质量比1:1的比例用pH9.6、0.05M的碳酸盐缓冲液稀释至0.1～0.4ug/人份后再包 被到空白微孔板上,达到最佳的包被效果，。

所述酶结合物工作液中的抗体按体积比1:1000~10000的比例，用含牛血清、防腐 剂P300和表面活性剂Tween-20的pH7.4的Tris-Hcl缓冲液进行稀释，以兼顾灵敏度和特异 性，使试剂盒达到最佳水平。

所述高亲和力质控品中CMVIgG高亲和力抗体按体积比1:100~500的比例，用 pH7.40.02MPBS并含有BSA的缓冲液进行稀释。选择最佳稀释比例，以满足试剂盒的性能 要求。

所述低亲和力质控品中CMVIgG低亲和力抗体按体积比1:550~100的比例，用 pH7.40.02MPBS并含有BSA的缓冲液进行稀释。选择最佳稀释比例，以满足试剂盒的性能 要求。