[发明专利]一种松萝中有机酸单体的分离制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及逆流色谱分离制备方法，具体地说是关于运用pH区带逆流色谱法从松萝粗提物中分离制备有机酸单体的方法。

技术背景

松萝为松萝科植物长松萝(Usnea longissima Ach.)和破茎松萝(Usnea diffracta Vain.)的干燥地衣体，具有清肝、化痰、止血、解毒等功效，可用于治疗头痛、目赤、咳嗽痰多、疟疾、瘰疬、白带，崩漏、外伤出血、痈肿、毒蛇咬伤等。主要有效成分为有机酸类化合物，包括苔色酸、巴尔巴地衣酸、环萝酸和松萝酸。其中，松萝酸是其代表性成分，是一种广谱抗菌素，对多数革兰氏阳性细菌有强大的抑制作用，也能抑制结核菌的生长，用于治疗化脓性创伤、二度烧伤、局部结核等，此外，还有抗癌、抗原虫以及解痉等作用。

迟春艳等在《食品科学》(Vol.30,No.03,2009,127～129)发表了“制备型高速逆流色谱分离纯化长松萝中的松萝酸”，研究采用正己烷-乙腈-乙酸乙酯-水(8:7:5:0.8)的两相体系将石油醚(60-90℃)回流浸提的粗提物进行制备型高速逆流色谱的分离纯化，一次进样25mg，可得到松萝酸11.2mg。利用高效液相色谱检测该样品纯度达到99％。

冯洁等在《中国中药杂志》(Vol.l34,No.6,2009,708～711)发表了“长松萝化学成分研究”，研究应用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱和HPLC柱色谱法分离纯化化合物，利用IR、UV、MS和NMR数据鉴定化合物结构。结果从松萝中分离鉴定了13个化合物,分别为赤星衣酸乙酯(1)，木栓酮(2)，β-香树脂醇(3)，β-谷甾醇(4)，2,4-二羟基-3,6-二甲基苯甲酸甲酯(5)，坝巴酸(6)，泽屋萜(7)，苔色酸乙酯(8)，3β-羟基-粘霉-5-烯(9)，齐墩果酸(10)，(+)-松萝酸(11)，苔色酸甲酯(12)和4-甲基-2,6-二羟基苯甲醛(13)。

Wang Xiao等在《Journal of Chromatography A》(Vol.1103,2006,166～169)发表了“Preparative separation of cichoric acid from Echinacea Purpurea by pH-zone-refining counter-current chromatography”，研究采用乙醇超声提取，回收乙醇，得菊苣酸浓缩液2.3L。用AB-8大孔吸附树脂的层析柱进行初步纯化，首先用水冲洗大孔吸附树脂柱至洗脱液无颜色，然后用30％乙醇洗脱目标化合物，得14.9g样品粗提物。最后采用叔丁基甲醚-乙腈-水(4:1:5)的溶剂系统，上层有机相加10mmol/L三氟乙酸作为固定相，下层水相加10mmol/L氨水作为流动相，一次进样3g，经过2次分离，得到目标化合物563mg，经过HPLC分析检测得知所得菊苣酸纯度为95.6％。

Wang Xiao等在《Journal of separation science》(Vol.30,2007,3214～3217)发表了“Large-scale separation of salvianolic acid B from the Chinese medicinal plant Salvia miltiorrhiza by pH-zone-refining countercurrent chromatography”，研究用95％乙醇回流提取，减压浓缩，得浓缩液；浓缩液加一倍量水，用Na₂CO₃调pH至7.5，用乙醚萃取；水相用盐酸调pH值至3，用乙醚萃取，回收乙醚，得红色粉末状丹参粗提物57.19g。采用叔丁基甲醚-水(1:1)，上层有机相加三氟乙酸(浓度10mmol/L)作为固定相，下层水相加氨水(浓度10mmol/L)作为流动相。一次进样2.0g，得丹酚酸B 524.2mg和少量的迷迭香酸，所得化合物纯度均大于93％。