[发明专利]一种圆叶鸟巢蕨的组培快繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及农业生物技术领域，尤其涉及一种圆叶鸟巢蕨的组培快繁方法。

背景技术

圆叶鸟巢蕨是一种拉丁名为Neottopterisniduscv."Avis"的中型附生蕨，是南 洋巢蕨(Aspleniumaustralasicum)驯化出的一个圆叶盆栽品种，株形呈漏斗状 或鸟巢状。根状茎短而直立，柄粗壮而密生大团海绵状须根，能吸收大量水分。 叶簇生，辐射状排列于根状茎顶部，中空如巢形结构，能收集落叶及鸟粪；革 质叶阔披针形，两面滑润，叶脉两面稍隆起，孢子囊群长条形。

圆叶鸟巢蕨具有四季常青、株形丰满、淡雅秀丽、叶色葱绿等特点，主要 用作室内布景盆栽，其叶片是优良的花材；卷曲的嫩叶可以煮食、也可做泡菜； 鸟巢蕨的性味微苦，清热解毒，可用于药材。

鸟巢蕨类植物传统的繁殖方法为营养繁殖、孢子繁殖和组织培养，营养繁 殖通常需要切割母株，繁殖率低且易伤害母株，不适用于批量植苗。孢子繁殖 对培育环境要求条件高且培育周期长，不适用商业化植苗。相对来说，组织培 养生产成本低，条件可控，周期短，因此可大规模植苗。

目前，还未有一种适用圆叶鸟巢蕨组织培养并快速繁殖的方法，直接从叶 子组织培养。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种圆叶鸟巢蕨的组培快繁方法，包括以下步骤：

(1)愈伤组织诱导：将外植体材料清洗后，在氯化汞溶液中表面灭菌7-10 min，用水冲洗，切成块状接种于诱导培养基，45天后诱导产生愈伤组织；外植 体材料为未展开的圆叶鸟巢蕨嫩叶，诱导培养基成分为MS改良培养基、1、0-2.0 mg/L6-BA和0.5-1.0mg/LNAA；

(2)增殖培养：将愈伤组织接种于增殖培养基进行增殖，增殖培养基成分 为MS基本培养基、0.5-1.0mg/L6-BA和0.1-0.5mg/LNAA。

(3)孢子体诱导：将增殖培养后的愈伤组织接种于分化培养基，处理30 天后获得发芽的孢子体，分化培养基成分为MS基本培养基，0.4-0.5mg/L6-BA 和0.1-0.2mg/LNAA；

(4)生根培养：待孢子体的叶片长到2-3cm后，接种于生根培养基培养成 苗，30d后苗的基部长出棕色的根，生根培养基成分为MS改良培养基、 0.1-0.2mg/LNAA、10-20g/L蔗糖和0.5-0.8g/L活性炭；

(5)炼苗移栽：待苗长有2～3条根，高度在4cm以上时，进行炼苗移栽， 置于太阳光下炼苗5-7d后，取出瓶苗，洗净根部附着的生根培养基，晾干并种 植于灭菌后的培养基质中，培养基质为椰糠、泥炭土和火山岩的混合物。

本发明的一种圆叶鸟巢蕨的组培快繁方法，通过培养基的改进，通过培养 基配方改进，愈伤组织诱导率为65.29％，增殖率为8.71％，分化率为达到88.35％， 生根率达到91.21％，成活率达到95.3％。

本发明工艺流程简单，以原叶体形式进行增殖，可获得大量的原叶体，通 过增殖、孢子体诱导、生根、移栽等过程，获得大量可用于生产栽培的种苗， 且获得的种苗生理年龄一致，生长整齐，适合工厂化育苗和规模化栽培。

附图说明

图1为一种圆叶鸟巢蕨增殖培养效果图；

图2为一种圆叶鸟巢蕨孢子体诱导培养效果图；

图3为一种圆叶鸟巢蕨生根培养效果图；

图4为一种圆叶鸟巢蕨炼苗移栽效果图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式结合附图对本发明作进一步详细说明。

本发明的MS基本培养基是实验室常用的培养基，MS改良培养基在基本培 养基的基础上改良，MS基本培养基包含1650mg/LNH₄N0₃和1900mg/LKNO₃， 1/2MS改良培养基包含825mg/LNH₄N0₃和950mg/LKNO₃，2/3MS改良培养 基包含1100mg/LNH₄N0₃和1266mg/LKNO₃，1/3MS改良培养基包含550mg/L NH₄N0₃和633mg/LKNO₃，6-BA为6-苄氨基腺嘌呤，NAA为a-萘乙酸。