[发明专利]一种负载前列腺癌抗原的DC细胞及一种DC细胞肿瘤疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及细胞免疫领域，尤其涉及一种负载前列腺癌抗原的DC细胞及一种DC细胞肿瘤疫苗。

背景技术

前列腺癌是指发生在前列腺的上皮性恶性肿瘤。2004年WHO《泌尿系统及男性生殖器官肿瘤病理学和遗传学》中前列腺癌病理类型上包括腺癌(腺泡腺癌)、导管腺癌、尿路上皮癌、鳞状细胞癌、腺鳞癌。其中前列腺腺癌占95％以上，因此，通常我们所说的前列腺癌就是指前列腺腺癌。前列腺癌是老年男性常见疾病，近几年前列腺癌在中国的诊出率呈显著增高趋势。

近年来，随着基因组学和蛋白质组学的进步，研究发现一些蛋白在前列腺癌患者的体内异常表达，例如：

1979年Wang等首先从前列腺组织中分离出前列腺癌特异性抗原PSA。PSA的分子量为34kDa，存在于前列腺内质网和前列腺上皮细胞及分泌物中，当人患上前列腺癌时，患者血清中游离的PSA(F-PSA)及总PSA(T-PSA)值均明显升高，以T-PSA升高更明显，故游离PSA与总PSA比值(F/T比值)下降。F/T比值可用于区别前列腺癌与前列腺增生症。尤其当PSA水平限定在4～10μg/L范围时，应用F/T比值较PSA为优。目前PSA已成为前列腺癌最敏感的瘤标，前列腺癌危险性随PSA升高而增大。因此，PSA对于前列腺癌的早期诊断、临床分期、术后疗效观察及随访具有重要的临床意义。越来越多证据显示：前列腺特异性抗原(PSA)水平稳定升高者发生前列腺癌的可能性更大，如果患者的PSA值升高迅速，那么其癌症类型更可能威胁生命。因此，将前列腺癌患者血清中的PSA分离浓缩出来具有十分重大的意义。

随着研究的深入，还有更多的抗原蛋白在前列腺癌组织中被发现。

树突状细胞(Dendriticcells，DC)是体内功能最强的抗原递呈细胞(Antigenpresentingcell，APC)，能够刺激初始的T细胞增殖，启动免疫应答；还能够呈递抗原给MHC-I类限制性CD8+和MHC-II类限制性CD4+T淋巴细胞，诱导特异性免疫反应，被称为“天然免疫佐剂”，因此在诱导免疫应答中具有独特的地位。近年来，以DC为基础的免疫治疗在临床应用中得到越来越广泛的关注，是国内外研究的热点。

现有的树突状细胞体外负载的抗原主要是肿瘤细胞株裂解物。但肿瘤细胞株在体外传代过程中表面抗原可能发生改变，制得疫苗的特异性不强，且制得DC细胞的增殖效果较弱。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种负载前列腺癌抗原的DC细胞及一种DC细胞肿瘤疫苗，其DC细胞的增殖效果更好，疫苗的特异性增强，对肿瘤细胞的杀伤效果提高。

本发明提供的负载前列腺癌抗原的DC细胞制备方法，包括：

步骤1：分离自外周血中CD14+细胞；

步骤2：使CD14+细胞分化为DC细胞；

步骤3：分离前列腺癌患者血浆中分子量为10kDa～50kDa的蛋白；

步骤4：以分子量为10kDa～50kDa的蛋白刺激所述DC细胞，制得负载前列腺癌抗原的DC细胞。

采用超滤的方式分离前列腺癌患者血浆中分子量为10kDa～50kDa的蛋白。具体为，首先截留前列腺癌患者的血浆中分子量小于50kDa的分子，经浓缩后，弃除分子量小于10kDa的蛋白，即获得该蛋白。

前列腺癌患者血浆中分子量为10kDa～50kDa的蛋白主要包括PSA。

经两次超滤后，蛋白的浓度为2.115mg/mL。

作为优选，前列腺癌患者的血浆为自体血浆。

与健康人或其他癌症患者相比，前列腺癌患者血浆中一些特殊的蛋白表达量增高，本发明将这些蛋白富集并将它们负载在DC细胞上制备疫苗。

在本发明的实施例中，步骤4中刺激所用分子量为10kDa～50kDa的蛋白浓度为50μg/mL～60μg/mL。

在本发明的实施例中，步骤4中刺激的时间为48h。

本发明以来自前列腺癌患者血浆的分子量为10kDa～50kDa的蛋白刺激DC细胞成熟。该蛋白主要包括PSA。以该蛋白刺激后的DC细胞增殖能力较好，细胞中CD86+的表达率较高。

在本发明的实施例中，步骤1中分离采用磁珠法。

在一些实施例中，磁珠法分离CD14+细胞具体为：分离外周血中的单个核细胞后，以磁珠法分离CD14+细胞。

作为优选，分离CD14+细胞的血浆为自体血浆。

在本发明的实施例中，步骤2中分化的诱导剂为GM-CSF和IL-4。