[发明专利]微乳色谱测定丹参有效成分指纹图谱的方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及检测技术领域，更具体地，涉及一种微乳色谱测定丹参有效成分指纹图谱的方法及应用。

背景技术

微乳液相色谱(MELC)是在胶束液相色谱(MLC)的基础上发展起来的。微乳是热力学稳定的液体分散体系，包括表面活性剂、助表面活性剂(中链醇)、油相和水相。微乳主要有2种类型：油包水(W/O)和水包油(O/W)，O/W型由于其高的含水量和低的粘度，在反相HPLC中广泛使用。如图1所示，MELC中的分配特性由以下两种方式决定，首先，固定相通过吸附表面活性剂层而得到修饰，改变了物质在固定相中的保留模式。另外，物质可以从水相或固定相中分配进入油滴中，这提供了第二种分配机制。MELC其中最重要的一个性质就是可以在不用梯度洗脱的情况下同时快速分离水溶性和脂溶性的物质，这给快速预测多种药物的生物活性提供了基础。

微乳液相色谱(MELC)作为一种类生物膜的色谱体系，同样可用于预测药物的生物活性，用于构建药物活性高通量筛选平台。该方法可以测定不同微乳体系下药物的logk与药物透过血脑屏障的分配系数(logBB)的回归分析拟合优度，筛选用于预测logBB的最优微乳体系，并通过交叉验证证明了模型可靠性。此外通过主成分分析(PCA)与logp、BMC，IAM等常用预测模型进行比较，可以验证微乳色谱在药物透过血脑屏障方面的可靠性。

中药是一个典型的复杂体系，其有效组分或有效部位形成了中药多组分的生物活性基础。中药有效组分或有效部位是中药有效性的化学物质基础，传统的中药化学指纹图谱主要用于中药质量评价研究，只涉及到中药的稳定性和可控性，而没反映中药多组分的生物有效性。中药的全指纹成分的生物活性是中药有效性的首要条件，构建中药活性成分高通量筛选平台，对于进一步研究中药的有效性作用机制具有重要的意义。

生物分配微乳液相色谱模型作为一种新的预测药物生物活性的方法，相对细胞模型和动物模型要简便很多，特别是在药物吸收、药动学、药效学参数的预测中具有简便快速等优点，有利于实现药物的高通量筛选。

但目前未见利用微乳液相色谱法实现中药丹参多组分生物指纹图谱的构建的相关技术报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，针对现有中药丹参多组分生物指纹图谱的构建的技术不足，提供一种一种微乳色谱测定丹参有效成分指纹图谱的方法。

本发明要解决的另一技术问题是提供所述方法的应用。

本发明的发明目的通过以下技术方案予以实现：

提供一种微乳色谱测定丹参有效成分指纹图谱的方法，以微乳为流动相，色谱柱采用AgelaOdyssilC18columns(150mm×4.6mm，i.d.5μm)或AgelaOdyssilC18columns(250mm×4.6mm,i.d.5μm)；流速：0.8ml/min；紫外检测波长：270nm；柱温：30℃；进样量：10μL；

所述流动相为以下mp₁～mp₈的任意一种：

优选地，所述微乳流动相的制备方法包括以下步骤：

S1.按比例将表面活性剂溶解于水相中，然后将油和助表面活性剂(正丁醇)加入到表面活性剂溶液中获得混合溶液；

S2.将S1所得混合溶液经两次超声处理后静置过夜，形成稳定的微乳。

优选地，步骤S2所述两次超声处理第一次处理的时间为20min，第二次超声处理的时间为10min。

所述微乳在使用前，用0.45μm尼龙滤膜过滤。

优选地，标准物质的储备液是采用甲醇(色谱纯)配制成0.5mg/mL的溶液。工作溶液为50μg/mL，是采用储备液用流动相稀释得到，并用0.45μm尼龙滤膜过滤。

本发明同时提供了所述方法的应用。本发明在研究了微乳液相色谱法(MELC)测定不同类型中性和碱性药物的logK及油-水分配系数logP方法，以及测定丹参药材中的全溶解性成分的指纹图谱，以中药标准物质的logP与logk的线性拟合方程，预测全谱指纹峰的logP。对于被动吸收的药物，药物的吸收程度主要取决于药物的油水分配系数logP，所以通过微乳色谱测定药物成分的保留因子logK，进而求出药物成分的logP，从而通过体外logP的测定来预测药物的吸收。本发明所述微乳色谱测定丹参有效成分指纹图谱的方法可以很好地用于预测丹参有效成分吸收。

本发明的有益效果是：