[发明专利]天然组织来源的脱细胞联合脱钙骨材料及其制备方法在审
| 申请号： | 201510860409.5 | 申请日： | 2015-11-30 |
| 公开（公告）号： | CN105435307A | 公开（公告）日： | 2016-03-30 |
| 发明（设计）人： | 赵劲民;宗少晖;苏伟;秦安;林贤丰;韦庆军 | 申请（专利权）人： | 广西医科大学 |
| 主分类号： | A61L27/36 | 分类号： | A61L27/36;A61L27/50 |
| 代理公司： | 广西南宁公平专利事务所有限责任公司 45104 | 代理人： | 杨立华 |
| 地址： | 530021 广西壮*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 天然 组织 来源 细胞 联合 脱钙骨 材料 及其 制备 方法 | ||
1.一种天然组织来源的脱细胞联合脱钙骨材料的制备方法，其特征在于：将哺乳动物任意骨组织经含蛋白酶抑制剂的生理盐水缓冲液、有机溶剂溶液、含TritonX的PBS缓冲液、含SDS的PBS缓冲液、含胰酶的PBS缓冲液、含DNA酶的PBS缓冲液、EDTA等渗液和超声波处理，获得脱细胞、脱钙的骨材料。
2.根据权利要求1所述的天然组织来源的脱细胞联合脱钙骨材料的制备方法，其特征在于：所述哺乳动物任意骨组织为四肢长骨、椎骨、髂骨。
3.根据权利要求1所述的天然组织来源的脱细胞联合脱钙骨材料的制备方法，其特征在于：
所述含蛋白酶抑制剂的生理盐水缓冲液，氯化钠浓度为1％-5％，蛋白酶抑制剂含量为10KIU/ml；
所述有机溶剂溶液为等体积比的氯仿和甲醇溶液、体积浓度10％-100％的丙酮溶液或体积浓度30％-70％的乙醇溶液；
所述含TritonX的PBS缓冲液为体积浓度1％-10％的TritonX-200或TritonX-100的PBS缓冲液；
所述含SDS的PBS缓冲液为质量浓度0.5％-10％的SDS的PBS缓冲液，其中混合1-20mmol/L的Tris；
所述含胰酶的PBS缓冲液中胰酶浓度为0.25％-5％；
所述含DNA酶的PBS缓冲液中DNA酶浓度为0.01-0.5mg/ml；
所述EDTA等渗液浓度为0.1％-10％。
4.根据权利要求3所述的天然组织来源的脱细胞联合脱钙骨材料的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)取哺乳动物全身任意骨组织用无菌生理盐水漂洗3次、20分钟/次，去除血液、残余肌肉组织、毛发和韧带等组织；
(2)在含蛋白酶抑制剂的生理盐水缓冲液中，恒温45℃摇床150rpm震荡8-24小时；
(3)在有机溶剂溶液中，恒温45℃摇床150rpm震荡脱脂2-12小时；
(4)在含TritonX的PBS缓冲液中，加入青霉素和链霉素混合抗菌液，恒温45℃摇床150rpm震荡3-72小时；
(5)在含SDS的PBS缓冲液中，加入青霉素和链霉素混合抗菌液，恒温45℃摇床150rpm震荡2-96小时；
(6)在含胰酶的PBS缓冲液中，加入青霉素和链霉素混合抗菌液，37℃摇床150rpm震荡1-12小时；
(7)在含DNA酶的PBS缓冲液中，加入青霉素和链霉素混合抗菌液，37℃摇床150rpm震荡1-12小时；
(8)在EDTA等渗液中，以功率20-200W的超声波机器处理2-24小时；
(9)在无菌生理盐水中，37℃摇床150rpm震荡72小时，即得天然组织来源的脱细胞联合脱钙骨材料。
5.根据权利要求4所述的天然组织来源的脱细胞联合脱钙骨材料的制备方法，其特征在于：所述混合抗菌液中青霉素和链霉素的浓度为10KIU/ml、10KIU/ml，青霉素和链霉素的比例为1∶1；步骤(4)-(7)中PBS缓冲液和混合抗菌液体积比分别为10∶1、10∶1、5∶1、5∶1。
6.根据权利要求4所述的天然组织来源的脱细胞联合脱钙骨材料的制备方法，其特征在于步骤(2)-(7)中，每个步骤完成后均用生理盐水冲洗5小时。
7.权利要求1至4任一所述制备方法得到的天然组织来源的脱细胞联合脱钙骨材料。
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