[发明专利]人β3乙酰氨基葡萄糖基转移酶8双抗体夹心ELISA试剂盒

权利要求书

1.一种人β3乙酰氨基葡萄糖基转移酶8双抗体夹心ELISA试剂盒，其特征在于：包括： 洗涤液、样品稀释液、显色液、终止液、包被抗体的酶标板、检测抗体、酶标抗体、标准对照蛋 白。

2.根据权利要求1所述的人β3乙酰氨基葡萄糖基转移酶8双抗体夹心ELISA试剂盒，其 特征在于：所述包被抗体的酶标板是以鼠抗人β3乙酰氨基葡萄糖基转移酶8单克隆抗体为 包被抗体，用包被液将包被抗体稀释，每孔加入稀释后的包被抗体，并在过夜包被后用洗涤 液洗涤；再向酶标板中加入封闭液，等待反应，最后洗涤液洗涤。

3.根据权利要求2所述的人β3乙酰氨基葡萄糖基转移酶8双抗体夹心ELISA试剂盒，其 特征在于：所述检测抗体是兔抗人β3乙酰氨基葡萄糖基转移酶8多克隆抗体。

4.根据权利要求3所述的人β3乙酰氨基葡萄糖基转移酶8双抗体夹心ELISA试剂盒，其 特征在于：所述酶标抗体是辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔抗体。

5.根据权利要求4所述的人β3乙酰氨基葡萄糖基转移酶8双抗体夹心ELISA试剂盒，其 特征在于：所述标准对照蛋白：包括阳性对照β3GnT8蛋白和阴性对照大肠杆菌菌体蛋白。

6.根据权利要求2至4任意一项所述的人β3乙酰氨基葡萄糖基转移酶8双抗体夹心 ELISA试剂盒，其特征在于：所述包被抗体被包被液稀释后的浓度是5μg/mL，稀释后的包被 抗体每孔加入量为100μL，过夜包被的温度为4℃；过夜包被后洗涤液洗涤次数为3~4次；酶 标板中加入封闭液的量为每孔100μL，酶标板中加入封闭液的反应温度是37℃，反应时间为 1~2小时，反应结束后洗涤液洗涤次数为3~4次。

7.根据权利要求6任意一项所述的人β3乙酰氨基葡萄糖基转移酶8双抗体夹心ELISA试 剂盒，其特征在于：所述的包被抗体的制备方法为：

第一，将β3乙酰氨基葡萄糖基转移酶8蛋白与弗氏完全佐剂混合，用BALB/c小鼠进行皮 下免疫；

第二，分别于BALB/c小鼠初次后，更换为弗氏不完全佐剂对BALB/c小鼠进行第二次和 第三次免疫；

第三，在BALB/c小鼠第三次免疫对BALB/c小鼠进行腹腔注射加强免疫；

第四，按照常规杂交瘤制备方法制备脾脏B淋巴细胞与SP2/0细胞的融合杂交瘤细胞 株，进行单克隆细胞分选培养，经包被β3乙酰氨基葡萄糖基转移酶8蛋白的ELISA筛选鉴定 获得阳性杂交瘤细胞株；

第五，借助BALB/c小鼠腹水瘤制备鼠抗人β3乙酰氨基葡萄糖基转移酶8单克隆抗体，腹 水经分离纯化后获得用于双抗体夹心ELISA试剂盒的包被抗体。

8.根据权利要求7任意一项所述的人β3乙酰氨基葡萄糖基转移酶8双抗体夹心ELISA试 剂盒，其特征在于：所述第一步中β3乙酰氨基葡萄糖基转移酶8蛋白与弗氏完全佐剂的混合 比例为1:1；每只BALB/c小鼠免疫总量0.2mL进行皮下免疫；所述第二步中对BALB/c小鼠进 行第二次和第三次免疫的具体时间是在BALB/c小鼠初次免疫3周后和5周后；第三步中对 BALB/c小鼠进行腹腔注射加强免疫的具体时间是在BALB/c小鼠第三次免疫2周后且细胞融 合前1天。