[发明专利]一种快速高密度培养青钱柳悬浮细胞的方法

权利要求书

1.一种快速高密度培养青钱柳悬浮细胞的方法，其特征在于，步骤如下：

（1）愈伤组织的诱导及继代：

按照常规进行青钱柳愈伤组织的诱导，然后进行继代培养，在第9-11代时，获得质地松散，生长旺盛稳定的淡黄色愈伤组织；

（2）制备复方中药提取液：

如下所述均为质量份；

取5-6份黄芪，3-6份淫羊藿，2份党参，3-5份伸筋草，2份天山雪莲，0.6份罗汉果，上述药物按传统煎煮方法加300份煎煮至50份水时，将药液冻干为粉；

精确称取100mg冻干粉，加入1mLPBS并置于80℃助溶，8000r/min离心10min，取上清液过滤，分装并-20℃保存；

（3）快速高密度培养青钱柳悬浮细胞：

取青钱柳生长旺盛、质地松散的淡黄色愈伤组织，用镊子夹碎后转移到液体培养基中振荡悬浮培养，培养温度26℃，摇床转速为120r/min；

所述青钱柳悬浮培养的培养基由以下组分组成：MS+5-8mg/L复方中药提取液+0.05mg/L2,4-D+0.6mg/LNAA+0.6mg/LKT+42g/L蔗糖，接种量为7%，摇瓶装液量的体积分数为38%，初始pH值为5.0。

2.权利要求1所述的快速高密度培养青钱柳悬浮细胞的方法，其特征在于：

在一个培养周期内，悬浮培养的青钱柳细胞的生长曲线呈“S”型，第8d，青钱柳鲜重达到最大值208-389g/L。