[发明专利]一种基于光纤免疫传感检测邻苯二甲酸酯类化合物浓度的方法

说明书

技术领域

本发明涉及邻苯二甲酸酯类化合物的检测，具体涉及一种基于光纤免疫传感检测邻苯二甲酸酯类化合物浓度的方法，属于生物检测技术领域。

背景技术

邻苯二甲酸酯类化合物（phthalateesters，PAEs）又名酞酸酯，作为增塑剂被广泛应用于工业生产和塑料制品中，可提高塑料制品的塑性和强度。PAEs一般为无色透明的油状粘稠液体，难溶于水，易溶于甲醇、乙醇和乙醚等有机溶剂，属于难挥发、中等极性、高脂溶性物质。在塑料制品中PAEs与塑料分子的相容性较好，二者间不能形成有效的化学键合，而是通过氢键或范德华力连接，彼此保持各自独立的化学性质。PAEs是环境内分泌干扰物，进入动物体内会产生类雌激素作用，阻止与动物生殖和发育有关的激素的合成、分泌、贮存、运输、结合和清除等过程，干扰血液维持正常的激素水平，具有致癌性、致畸性和致突变性。

目前，国内外检测PAEs的主要方法有气相色谱法（GC）、气相色谱-质谱法联用（GC-MS）、高效液相色谱法（HLPC）和酶联免疫吸附法（ELISA）等。仪器分析方法的样品前处理步骤复杂、操作繁琐，导致检测成本高、周期长，无法满足批量样品的快速筛查和现场检测的实际要求。ELISA法存在重现性较低、稳定性较差等问题，测定结果容易受外部环境和人为因素的影响，并且不能用于现场快速分析。将荧光免疫分析与光纤传感技术结合的光纤免疫传感技术具有操作简便、易于仪器化和可以实时监测等特点，能够弥补ELISA法的不足。

现有免疫分析方法的线性范围较窄、灵敏度较低，制备的抗体只能检测单一PAEs，不能满足同时检测多种PAEs的实际需要。

发明内容

针对现有技术存在的上述不足，本发明的目的在于提供一种基于光纤免疫传感检测邻苯二甲酸酯类化合物浓度的方法，本方法可以同时检测多种PAEs，即能够得到试样中所有PAEs的总浓度，且具有较高的灵敏度和精密度，样品仅需简单提取，检测快速。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种基于光纤免疫传感检测邻苯二甲酸酯类化合物浓度的方法，步骤如下，

1）光纤免疫传感检测系统的构建；

光纤免疫传感检测系统包括激光发射装置、用于光路传递的非对称光纤耦合器、光纤探头、样品池、荧光滤光片、光电二极管、锁相放大器和计算机，非对称光纤耦合器由单模光纤和多模光纤构成；非对称光纤耦合器的多模光纤一端通过光纤连接器接光纤探头，多模光纤另一端朝向荧光滤光片；光纤探头置于样品池中，光纤探头表面附着有包被原；

2）光纤免疫传感检测标准抑制曲线的建立；

2.1）将600μL浓度为0.5μg·mL^-1的荧光标记抗体溶液与600μL某已知浓度的邻苯二甲酸酯类化合物标准溶液混合，其中抗体为可与多种邻苯二甲酸酯类化合物特异性结合的广谱性抗体，预反应5min；再用蠕动泵将该混合液以0.3mL·min^-1的速度输入到样品池，持续2min，继续反应6min，使得光纤探头表面抗原与荧光标记抗体结合；启动激光发射装置，发出的激光依次通过非对称光纤耦合器的单模光纤和多模光纤、光纤连接器，进入光纤探头，在光纤探头表面产生倏逝波，倏逝波激发探头表面的荧光物质产生荧光；部分荧光耦合回光纤探头，经光纤连接器进入非对称光纤耦合器的多模光纤，并从多模光纤的另一端射出；射出的荧光经荧光滤光片滤除反射的激发光后，绝大部分荧光透过，透过的荧光经雪崩光电二极管探测并将光信号转换为电信号，电信号经锁相放大器放大后，由计算机采集并进行数据处理，从而得到与已知浓度的该邻苯二甲酸酯类化合物对应的响应信号；

2.2）改变邻苯二甲酸酯类化合物浓度，重复步骤2.1），得到不同已知浓度下的该邻苯二甲酸酯类化合物对应的响应信号；

2.3）以该邻苯二甲酸酯类化合物的浓度对数值为横坐标，抑制率为纵坐标，绘制标准抑制曲线；抑制率指该邻苯二甲酸酯类化合物抑制时的响应信号值与无抑制时的响应信号值之比；无抑制时的响应信号值即步骤2.1）中邻苯二甲酸酯类化合物的浓度为0时的响应信号值；

3）待测邻苯二甲酸酯类化合物浓度的检测；

3.1）将已知浓度的邻苯二甲酸酯类化合物替换为待测邻苯二甲酸酯类化合物，然后重复步骤2.1），得到待测邻苯二甲酸酯类化合物对应的响应信号，计算获得抑制率；

3.2）根据光纤免疫传感检测标准抑制曲线上横坐标和纵坐标的对应关系，找到与待测邻苯二甲酸酯类化合物抑制率对应的浓度对数值，即可获得待测邻苯二甲酸酯类化合物的浓度。