[发明专利]一种提高转基因鸡孵化率的方法及使用的蛋壳开口器

权利要求书

1.一种提高转基因鸡孵化率的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)孵化器的消毒及种蛋的预孵化处理

对孵化器进行消毒，种蛋进行预孵化处理，放入孵化箱内开始孵化；1-18d的孵化温度为37.8℃，湿度为60％，19-21d的孵化温度为37℃，湿度为78％；

(2)种蛋的开口

开口前将蛋壳开口器和无菌操作台进行消毒，将孵化12-24h的种蛋从孵化箱内取出，在种蛋的赤道位置先用碘酊后用75％酒精擦拭消毒，用砂轮在蛋壳赤道面处研磨，一边研磨一边用酒精棉球擦拭蛋壳碎末，直至蛋壳赤道面上出现开口，观察鸡胚孵育情况；

(3)外源基因的注射

将开口后的鸡蛋，开口向上，放在操作台内静置2min，使鸡胚盘的位置漂浮在鸡蛋的开口处，将含有外源基因的转染液注射入鸡的胚盘中，用抗生素对开口处进行杀菌；

(4)种蛋的封口

种蛋的封口采用蛋清+蛋壳膜封口的方法，封口后放入孵化箱继续孵化；其中蛋清+蛋壳膜封口的方法为：将蛋壳膜在蛋清中润洗，然后在开口处覆盖第一层蛋壳膜，再在第一层蛋壳膜上交叉覆盖第二层蛋壳膜。

2.根据权利要求1所述的提高转基因鸡孵化率的方法，其特征在于，步骤(1)中孵化器的消毒方法为：将孵化器进行清洗，关闭进出气孔和风机，按照每立方米空间高锰酸钾10g，福尔马林15mL的比例依次加入高锰酸钾和福尔马林，混合，当混合溶液冒烟时，关闭孵化器门，消毒1h，消毒温度为15-20℃，湿度≥75％。

3.根据权利要求1所述的提高转基因鸡孵化率的方法，其特征在于，步骤(1)中种蛋的预孵化方法为：将新洁尔灭和水按照质量比1:1000的比例配制成新洁尔灭溶液，其中水温为30℃，将种蛋浸入新洁尔灭溶液中5min，洗净，取出，用脱脂棉擦拭干净。

4.根据权利要求1所述的提高转基因鸡孵化率的方法，其特征在于，步骤(3)中抗生素的制备方法：将青链霉素加入生理盐水中，使其终浓度为0.1μg/μL。

5.一种权利要求1-4任一项方法中使用的蛋壳开口器，其特征在于，所述蛋壳开口器包括手柄，手柄的一端设置有磨轮，另一端的端面上设置有置物凹槽，置物凹槽内装有酒精棉球。

6.根据权利要求5所述的蛋壳开口器，其特征在于，所述磨轮中心处设置有盲孔，盲孔的内壁上设置有内螺纹，手柄与磨轮相连的一端外侧设置有与盲孔内螺纹匹配的外螺纹，磨轮通过内螺纹、外螺纹与手柄旋接在一起，构成可拆卸的一体结构。

7.根据权利要求5所述的蛋壳开口器，其特征在于，所述磨轮为圆形。

8.根据权利要求7所述的蛋壳开口器，其特征在于，所述磨轮直径为1.25cm。

9.根据权利要求5所述的蛋壳开口器，其特征在于，所述酒精棉球伸出置物凹槽。

10.根据权利要求5所述的蛋壳开口器，其特征在于，所述的手柄未安装磨轮的一端套装有两端开口的中空塑料管，中空塑料管的内腔作为置物凹槽，酒精棉球置于置物凹槽内。