[发明专利]一种毛钩藤的指纹图谱检测方法

权利要求书

1.毛钩藤的指纹图谱检测方法，包括以下内容：

(1)供试品溶液的制备：取待测毛钩藤样品，加氨水浸泡，再加入三氯甲烷，甲醇， 超声提取，取出，放冷，过滤，滤液置于水浴上挥干，残渣用甲醇溶解，摇匀，微孔滤膜 过滤，取续滤液作为供试品溶液；

(2)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为乙腈，流动相 B为0.1％～0.5％氨水溶液，梯度洗脱，流速为0.8～1.2ml/min、检测波长为254～260nm、 柱温为20-30℃，记录时间为50-80min；

(3)标准指纹图谱的建立：以上述方法作为建立毛钩藤的指纹图谱的测试手段；依 据10批或10批以上样品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留 时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有8～ 12个；

(4)以(1)、(2)所述方法作为待测毛钩藤的指纹图谱的测试手段，制备待测样品 的指纹图谱；

(5)将待测毛钩藤的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求的部分或 全部：

I.计算待测毛钩藤的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.90～1.00；

II.待测毛钩藤指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的20％；

III.待测毛钩藤指纹图谱中有5％～50％的共有峰面积的比值与标准指纹图谱中各共 有峰面积的比值比较，其差值不得大于±50％。

2.如权利要求1所述的毛钩藤的指纹图谱检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中 毛钩藤样品为毛钩藤药材。

3.如权利要求2所述的毛钩藤的指纹图谱检测方法，其特征在于：所述毛钩藤药材 样品是通过阴干后切段、粉碎过60目筛、经45℃烘干至恒重的方法制备。

4.如权利要求1所述的毛钩藤的指纹图谱检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中 梯度洗脱参数为：0～45min，72％～45％B；45min～60min，45％～37％B。

5.如权利要求1所述的毛钩藤的指纹图谱检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中 10批或10批以上样品可以为每月采收一次、连续采收12个月及以上的毛钩藤药材。

6.如权利要求1-5任一项所述的毛钩藤的指纹图谱检测方法，其特征在于：所述方 法包括以下内容：

(1)供试品溶液的制备：取含毛钩藤为2.0g的待测毛钩藤样品粉末，加入1-3mL氨水 浸泡20-40min，再加入三氯甲烷20-30mL，甲醇2-8ml，超声提取45-75min，取出，放冷， 过滤，滤液置于50-60℃水浴上挥干，残渣用甲醇溶解于10mL量瓶中并定容至刻度，摇匀， 用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

(2)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为乙腈，流动相 B为0.1％～0.3％氨水溶液，梯度洗脱，参数为：0～45min，72％～45％B；45min～60min， 45％～37％B，流速为0.8～1.2ml/min、检测波长为254～260nm、柱温为20-30℃，记录时 间为50-80min；

(3)标准指纹图谱的建立：以上述方法作为建立毛钩藤的指纹图谱的测试手段；依 据10批或10批以上样品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留 时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有8～ 12个；

(4)以(1)、(2)所述方法作为待测毛钩藤的指纹图谱的测试手段，制备待测样品 的指纹图谱；

(5)将待测毛钩藤的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求的部分或 全部：

I.计算待测毛钩藤的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.90～1.00；

II.待测毛钩藤指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的10％；

III.待测毛钩藤指纹图谱中有5％～50％的共有峰面积的比值与标准指纹图谱中各共 有峰面积的比值比较，其差值不得大于±30％。

7.如权利要求6所述的毛钩藤的指纹图谱检测方法，其特征在于：所述方法包括以 下内容：

(1)供试品溶液的制备：取含毛钩藤为2.0g的待测毛钩藤样品粉末，加入2mL氨水浸 泡30min，再加入三氯甲烷25mL，甲醇5ml，超声提取60min，取出，放冷，过滤，滤液置 于60℃水浴上挥干，残渣用甲醇溶解于10mL量瓶中并定容至刻度，摇匀，用0.45μm微孔 滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

(2)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为乙腈，流动相 B为0.2％氨水溶液，梯度洗脱，参数为：0～45min，72％～45％B；45min～60min，45％～ 37％B，流速为1.0ml/min、检测波长为254nm、柱温为25℃，记录时间为60min；

(3)标准指纹图谱的建立：以上述方法作为建立毛钩藤的指纹图谱的测试手段；依 据10批或10批以上样品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留 时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有10个；

(4)以(1)、(2)所述方法作为待测毛钩藤的指纹图谱的测试手段，制备待测样品 的指纹图谱；

(5)将待测毛钩藤的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求的部分或 全部：

I.计算待测毛钩藤的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.90～1.00；

II.待测毛钩藤指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的10％；

III.待测毛钩藤指纹图谱中有5％～50％的共有峰面积的比值与标准指纹图谱中各共 有峰面积的比值比较，其差值不得大于±30％。