[发明专利]一种表达绿色荧光囊膜融合蛋白的REV病毒传染性克隆的构建方法在审
| 申请号： | 201510802359.5 | 申请日： | 2015-11-19 |
| 公开（公告）号： | CN105274089A | 公开（公告）日： | 2016-01-27 |
| 发明（设计）人： | 叶建强;周晓祥;秦爱建;邵红霞 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N15/63 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所 32207 | 代理人： | 卢亚丽 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表达 绿色 荧光 融合 蛋白 rev 病毒 传染性 克隆 构建 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种表达绿色荧光囊膜融合蛋白的REV病毒传染性克隆的构建方法，其特征在于包括以下步骤：
1)利用下述引物，以REV传染性克隆质粒SNV质粒为模板，PCR扩增出SNV线性化载体；
上游引物：5′CTAATTCTCCTTGTGGCTTGGTGGGGGTTT3′；
下游引物：5′GATTTTGCTCGCCTGGTCAACTTTACCCTC3′。
2)利用下述引物，以pcDNA3.1-EGFP质粒为模板，PCR扩增出绿色荧光蛋白基因EGFP；
上游引物：5′CAGGCGAGCAAAATCATGGTGAGCAAGGGCGAG3′；
下游引物：5′CACAAGGAGAATTAGCTTGTACAGCTCGTCCAT3′。
3)利用重组酶ExnaseTMII对步骤1)和2)得到的PCR产物进行快速重组克隆；阳性克隆转染DF1细胞拯救出表达绿色荧光囊膜融合蛋白的REV病毒。
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