[发明专利]一种复苏脂肪间充质干细胞的方法

权利要求书

1.一种复苏脂肪间充质干细胞的方法，其特征在于，包括：

步骤1、将传代至P3-P5代的脂肪间充质干细胞按照5000-10000/cm²的细胞密度用含10%FBS 的DMEM/F12培养基培养24h，用Hanks清洗后，再用无血清的DMEM/F12培养基培养，分别在培养24h、48h、72h时收集培养基上清，1000-2000rpm离心5-10min，去除沉淀，收集所有上清混合，滤膜过滤后获得条件培养基；

步骤2、将冻存的脂肪间充质干细胞放置在35-42℃的水浴锅中，震荡温育30-60秒，然后加入到5-10倍体积的条件培养基中，以1000-2000rpm离心3-5分钟，去上清，用条件培养基重悬沉淀，吹打混匀，并按照5000-10000/cm²的细胞密度用条件培养基放置在37℃、5%CO₂ 培养箱静置培养24小时后，更换条件培养基继续培养至细胞融合度达到80%-90%。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述P3-P5代脂肪间充质干细胞通过以下方法获得：

将抽取的成体脂肪用0.1%-0.5% I型胶原酶酶解消化，离心后沉淀用间充质干细胞完全培养基重悬并培养，每2-3天换液，待细胞融合度达到80%-90%，获得P0代；

用胰酶消化P0代细胞，离心后用间充质干细胞完全培养基重悬沉淀并传代培养，传代至P3-P5代。

3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述P3-P5代脂肪间充质干细胞通过以下方法获得：

将抽取的成体脂肪，用PBS清洗后，剪碎脂肪组织，并加入0.1%-0.5% I型胶原酶，在37℃，100-200rpm 条件下消化酶解30-50分钟，以1000-2000转离心5-10 分钟，去上清，加入间充质干细胞完全培养基重悬细胞沉淀，随后放置在37℃，5% CO₂细胞培养培养，每2-3天换液，待细胞融合度达到80%-90%，获得P0代；

用0.25%胰酶消化P0代细胞，离心后用间充质干细胞完全培养基重悬沉淀，5000-10000/cm² 细胞密度接种培养皿中继续培养，按照所述方式传代至P3-P5代。

4.权利要求1中所述条件培养基在复苏脂肪间充质干细胞中的应用。