[发明专利]角膜缘干细胞的分离方法在审
| 申请号： | 201510791044.5 | 申请日： | 2015-11-16 |
| 公开（公告）号： | CN105219704A | 公开（公告）日： | 2016-01-06 |
| 发明（设计）人： | 陈海佳;王一飞;葛啸虎;吴子杰;张维敏 | 申请（专利权）人： | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/074 | 分类号： | C12N5/074 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 赵青朵 |
| 地址： | 510000 广东省广州市国*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 角膜 干细胞 分离 方法 | ||
1.一种角膜缘干细胞的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将胎儿角膜缘组织以复合酶酶解；
步骤2：将所述酶解后的产物以角膜缘干细胞分离培养基培养后，传代；
所述复合酶包括中性蛋白酶和IV胶原酶；
所述角膜缘干细胞分离培养基包括AcSDKP、胎牛血清和基础培养液。
2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述复合酶中，中性蛋白酶和IV胶原酶的质量比为3:2～2:1。
3.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述复合酶与胎儿角膜缘组织的体积比为1:5。
4.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述复合酶酶解的温度为37℃，时间为10～20min。
5.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述复合酶以PBS配制，pH值为7.2。
6.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述复合酶酶解的终止液为含有FBS的PBS。
7.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述角膜缘干细胞分离培养基中，AcSDKP的质量分数为0.01％～10％。
8.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述角膜缘干细胞分离培养基中胎牛血清与基础培养液的体积比为(10～20)：(80～90)。
9.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述角膜缘干细胞分离培养基中基础培养液为DMEM液体培养基。
10.根据权利要求1所述的分离培养方法，其特征在于，步骤2所述培养的接种密度为1×105个/ml。
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