[发明专利]抗日本血吸虫Sj16分子单克隆抗体及其制备方法

说明书

本发明抗日本血吸虫Sj16分子单克隆抗体及其制备方法涉及的是生物医学领域，具体涉及一种能识别日本血吸虫Sj16分子的单克隆抗体的制备工艺。一种抗日本血吸虫Sj16分子单克隆抗体，是由保藏号为CCTCC NO.C2015173的抗日本血吸虫Sj16分子单克隆抗体杂交瘤细胞株5G2所分泌。一种抗日本血吸虫Sj16分子单克隆抗体的制备方法，筛选出高特异性产生抗Sj16分子的抗体的杂交瘤细胞株。本发明制备的单克隆抗体经间接酶联免疫法筛选，并用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析、酶联免疫吸附试验、蛋白免疫印迹分析等方法，鉴定了其与抗原结合的特异性和亲和力等特性。本发明制备的抗日本血吸虫Sj16分子单克隆抗体可为血吸虫病的早期诊断提供诊断试剂及Sj16分子作为免疫治疗药物研究中提供了一种研究工具。

技术领域

本发明抗日本血吸虫Sj16分子单克隆抗体及其制备方法涉及的是生物医学领域，具体涉及一种能识别日本血吸虫Sj16分子的单克隆抗体的制备方法。

背景技术

血吸虫可以感染人和其他多种哺乳动物。血吸虫尾蚴最早通过皮肤或黏膜进入终宿主体内，为了自身存活与发育，存在与宿主皮肤组织相适应的过程。近年来，学者研究血吸虫逃避宿主免疫应答机制时发现，血吸虫尾蚴进入皮肤后，在皮肤中停留2~3天并转变为童虫，在此期间血吸虫只引起轻微的炎性反应，而死亡的血吸虫尾蚴则可引起强烈的免疫应答。这一现象提示血吸虫能够分泌某些蛋白调节宿主免疫或炎症反应。在这一线索提示下，1996年 Ramaswamy 等在曼氏血吸虫的排泄分泌物中找到一种分子量为16.8kDa的蛋白质，命名为Sm16。曼氏血吸虫的Sm16蛋白通过抑制抗原介导淋巴细胞增殖及IL-2 产生，从而抑制宿主免疫应答。进一步研究表明，日本血吸虫同样存在类似结构和功能的蛋白，命名为Sj16。

Sm16/Sj16为血吸虫的尾蚴分泌物中分离得到一种分泌蛋白，因其分子量为16.8kDa，而被命名为Sm16/Sj16。Sm16/Sj16蛋白结构为9亚基低聚物，其分子长500bp，有117个氨基酸的开放式阅读框，包括1个18氨基酸的N端信号肽序列和3个磷酸化潜在位点（其中2个丝氨酸和1个酪氨酸）。通过氨基酸序列计算得到的成熟Sm16/Sj16蛋白分子量是11.5kDa，而Western blot显示其分子量约为16kDa。这可能是由转录后磷酸化修饰引起的。

研究表明Sm16/Sj16具有抗炎作用，其抗炎作用有望在其他炎症性疾病的诊断和治疗中发挥重要作用。孙希等观察到Sj16可以显著抑制角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀，进而减轻关节炎症状；有文献报道，重组Sj16不影响粒细胞性白血病WEHI-3B JCS细胞的活性，但能抑制其增殖，并具有时间和浓度依赖性；本室研究发现日本血吸虫尾蚴感染宿主过程中，Sj16与CD4+CD25+调节性T细胞密切关系。这些研究也进一步提示了Sj16可通过多途径下调宿主免疫反应Sm16/Sj16分子具有潜在的抗炎功能，研究人员可从血吸虫感染宿主的免疫逃避机制寻找靶点，研制新型抗炎制剂。

目前，对于血吸虫病检测的方法主要有经典的病原检查，如：毛蚴孵化法、直肠镜活组织检查等，操作较为繁琐，且检出率较低。Kohler和Milstein于1975年创立的B淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体（monoclonal antibodies，McAb）技术，作为一类用于基础研究、实验室诊断、临床治疗和预防的新型产物，其应用价值和开发前景已获得普遍的肯定。近年来在血吸虫诊断领域通过该技术，建立了多种血吸虫诊断方法，但受多种因素如循环抗原滴度、患者免疫状态等多种因素的影响检出率不高，尤其早期诊断还未有成熟的产品报道。

发明内容

本发明的目的是针对上述检测方法操作较为繁琐，检出率不高等不足之处，提供一种抗日本血吸虫Sj16分子单克隆抗体及其制备方法，是一种血吸虫病的诊断试剂。该试剂为一种能识别血吸虫的鼠源性单克隆抗体。

本发明公开的能识别血吸虫的鼠源单克隆抗体是以重组表达的Sj16蛋白为抗原，同时用该蛋白包被ELISA板，对得到的抗体进行筛选而获得的抗日本血吸虫Sj16分子的单克隆抗体。