[发明专利]一种使用磁微粒化学发光定量检测抗nRNP/Sm抗体IgG的试剂盒及其制备方法和检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学检测技术领域，具体涉及一种使用磁微粒化学发光定量检测抗nRNP/Sm抗体IgG的试剂盒及其制备方法和检测方法。

背景技术

1971年，Sharp在一组特殊的结缔组织病患者血清中发现抗核糖核蛋白抗体表现出高滴度，同时命名此结缔组织病为混合性结缔组织病。混合性结缔组织病是一种同时或不同时具有系统性红斑狼疮、多发性肌炎、硬皮病、类风湿关节炎病的综合症状，患者主要表现为雷诺现象、手指肿胀、皮疹、关节及肺部损害等病变。高滴度的抗nRNP/Sm抗体IgG在混合性结缔组织病患者中的检出率可达95-100％，抗体滴度和疾病活动度相关，被认为是重要的血清学标志。

目前临床上抗nRNP/Sm抗体IgG的检测有的膜条免疫法和酶联免疫吸附法。膜条免疫法应用的是膜条显色技术，其特点为固定几个项目在同一膜条测定，一般通过手工或者半自动膜条仪进行实验操作，最终通过肉眼进行定性判定，该技术灵敏度低，反应时间长，检测项目只能固定搭配组合，灵活性差。酶联免疫吸附法的灵敏度在膜条免疫法基础上有所提升，但仍然较低，并且线性范围窄，重复性差，反应时间也较长，仍然不能很好满足临床的应用。

磁微粒化学发光免疫分析法，较以前的膜条免疫法和酶联免疫吸附法，在检测灵敏度、检测范围、检测时间及自动化操作上有了大大提高，且没有污染，临床应用广。目前，使用磁微粒化学发光分析法在抗nRNP/Sm抗体IgG免疫分析产品的应用仍未见。

中国专利CN103105489A公开了检测自身免疫性疾病抗体的免疫印迹试剂盒及其制备方法，涉及一种检测多种自身免疫性疾病相关抗体的免疫印迹试剂盒，解决目前尚无用于多种自身免疫性疾病体检筛查的免疫印迹产品技术上的不足：在所述的硝酸纤维素膜或尼龙膜上含有:分别由dsDNA、Sm/RNP、CCP、SSA、SSB、GAD、ICA、IA-2A、TG、AMA-M2共10种中的至少两种天然或重组抗原包被而成的两条以上平行的检测线，1条高浓度质控带，1条中浓度质控带及1条低浓度质控带。该专利公开的是一种膜条免疫法，更能说明膜条免疫法存在的灵敏度较低、线性范围窄、重复性差和反应时间长的问题。

发明内容

为了克服现有技术中的缺陷，本发明提供一种使用磁微粒化学发光定量检测抗nRNP/Sm抗体IgG的试剂盒，能够低成本制备得到，且能够实现抗nRNP/Sm抗体IgG准确和高精确地定量测定。

本发明是通过如下技术方案来实现的：一种使用磁微粒化学发光定量检测抗nRNP/Sm抗体IgG的试剂盒，所述试剂盒包括：Anti-nRNP/SmIgG校准品、Anti-nRNP/SmIgG试剂1号、Anti-nRNP/SmIgG试剂2号、Anti-nRNP/SmIgG磁分离试剂、Anti-nRNP/SmIgG质控品和清洗液。

所述Anti-nRNP/SmIgG校准品包括6个液体校准瓶，所述液体校准瓶内目标浓度分别为0、5、20、50、100、200RU/mL的Anti-nRNP/SmIgG和牛血清白蛋白的Tris缓冲液；

所述Anti-nRNP/SmIgG试剂1号为1个含有生物素标记的nRNP/Sm抗原和牛血清白蛋白的Tris缓冲液的瓶；

所述Anti-nRNP/SmIgG试剂2号为1个含有碱性磷酸酶标记的羊抗人多克隆抗体和牛血清白蛋白的Tris缓冲液的瓶；

所述Anti-nRNP/SmIgG磁分离试剂为1个含有链霉亲和素标记的磁微粒和牛血清白蛋白的Tris缓冲液瓶；

所述Anti-nRNP/SmIgG质控品包括2个质控瓶，所述质控瓶内的浓度的范围分别为：16-24RU/mL和80-120RU/mL。

所述试剂盒检测原理为将待测样品、所述Anti-nRNP/SmIgG试剂1号混合温育，样品中的抗nRNP/Sm抗体IgG与nRNP/Sm抗原特异性结合，再加入所述Anti-nRNP/SmIgG磁分离试剂，抗nRNP/Sm抗体IgG与nRNP/Sm抗原的免疫复合物被吸附到磁微粒表面，洗涤去除未结合的抗体和杂质，加入Anti-nRNP/SmIgG试剂2号并混合温育。碱性磷酸酶标记(ALP)的羊抗人IgG抗体与已经结合在磁珠上的抗nRNP/Sm抗体IgG特异性结合。洗涤去除未结合的抗体和杂质后加入化学发光底物，ALP催化底物发光，测定相对发光强度(RLU)。在一定范围内RLU与样品中抗nRNP/Sm抗体IgG浓度呈正比，通过RLU就可以从标准曲线上计算出待测样品的抗nRNP/Sm抗体IgG含量。