[发明专利]AKR1B10蛋白和用于肝硬化诊断的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及医药生物技术领域，具体地说，涉及了一种肝硬化特异性抗原醛酮还原酶1B10（Aldo-KetoReductase1B10，AKR1B10），以及一种用于肝硬化的早期诊断、诊断、治疗指导、及预后判断的试剂盒。。

背景技术

慢性肝炎后肝硬化是指由于各种病因引起的肝脏慢性、进行性、弥漫性病变，其特点是在肝细胞坏死的基础上发生纤维化，并代之以纤维包绕的异常肝细胞结节（称之为假小叶），导致正常肝小叶结构和血管解剖的破坏。我国肝硬化的主要病因是病毒性肝炎，尤其是乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)和丁型肝炎(HDV)病毒引起的慢性、长期炎症可导致肝硬化。

肝硬化是一种常见疾病，逐渐进展，晚期出现肝功能衰竭、门静脉高压和多种并发症，是严重和不可逆的肝脏疾病。肝硬化目前无有效的治疗方法。在肝硬化的早期（代偿期），进行及时的干预，让患者避免重活动量工作，辅以饮食调节，如以高热量、高蛋白质、维生素丰富而易消化的食物为主。严禁饮酒，并限制脂肪，尤其是动物脂肪的过多摄人等，可避免或延缓其病情进展，预防晚期肝硬化及各种并发症的发生。

然而，早期肝硬化诊断比较困难，许多病理组织学证实为肝硬化的患者，常可无任何症状或仅出现非特异性的消化道症状。目前，对于肝硬化的早期诊断主要在于：①对病毒性肝炎患者严密随访观察；②对原因不明的肝大，特别是肝质地坚实、表面不光滑者，有肝病面容者，出现蜘蛛痣、肝掌及毛细血管扩张等体征者，采用包括超声、腹腔镜及肝组织活检等检查手段帮助确定性质。这些手段一则缺少特异性，二则临床操作也有实质性困难。急需更特异性的诊断或随访、追踪指标，尤其是无创性血清生物学指标。

AKR1B10蛋白是从人类原发性肿瘤组织中分离鉴定出来的。该蛋白质具有316个氨基酸，在多种人类肿瘤组织中高表达，并促进肿瘤细胞的生长与增值，在肿瘤的发生、发展中起重要作用。此前，本发明人研发了针对人类特异性抗原醛酮还原酶1B10蛋白（以下简称为AKR1B10）的特异性检测试剂盒及其抗体，以用于癌症的筛查、诊断、疗效判断、预后评估或复发监测。然而，经过进一步研发，发现该人类特异性抗原醛酮还原酶1B10蛋白是肝硬化的一个新的，特异性血清标记物，可用于肝硬化的早期诊断、诊断、治疗指导、及预后判断，而成就了本发明。

发明内容

本发明人新发现AKR1B10蛋白在肝硬化再生结节中高表达，并经细胞分泌，进入血液循环，使肝硬化患者血清中该蛋白水平升高。因此AKR1B10可以作为新的肝硬化血清标记物，可用于肝硬化的筛查、追踪、早期诊断、治疗指导和预后判断，因而成为本发明的基础。

因而针对人类肝硬化特异性抗原醛酮还原酶1B10(Aldo-KetoReductase1B10，AKR1B10)蛋白，开发出一种新的，灵敏、特异、高效的诊断试剂盒，用于肝硬化的筛查、诊断、疗效判断与预后评估。

具体而言，本发明涉及如下内容：

1.一种基于人类肝硬化特异性抗原醛酮还原酶1B10(AKR1B10)蛋白的诊断试剂盒。

2.该试剂盒可用于肝硬化的筛查、诊断、疗效判断与预后评估，其包含特异性检测AKR1B10的试剂。

3.项2所述的试剂盒，其中，所述特异性检测AKR1B10的试剂是特异性识别AKR1B10蛋白的特异性抗体；或所述特异性检测AKR1B10蛋白的试剂是特异性识别AKR1B10蛋白核酸的引物或探针：5’端：CAGAAAGCAGGACGTGGGACATC，3’端：GCACGTCGATTCGCGTCTATGAC。

4.项2-3中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂可用于检测血清与尿液等体液，或组织样本中的AKR1B10蛋白。

5.项2-4中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包含AKR1B10蛋白标准品。

6.项2-5中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒是酶联免疫法吸附测定(ELISA)试剂盒、时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）试剂盒及化学发光检测试剂盒。

7.项6所述的试剂盒，其包括：

包被有肝硬化特异性抗原AKR1B10特异性捕获抗体的检测板板；

生物素标记的另一种属来源的AKR1B10的特异性检测抗体。该捕获单克隆抗体与检测抗体均可与AKR1B10蛋白结合。

8.项7所述的试剂盒，其还包括：

包被缓冲液(1×PBS，pH7.3±0.1)；