[发明专利]检测猪肉中氮哌酮及其代谢物氮哌醇的残留量的方法

说明书

技术领域

本发明属于食品学检验领域。具体涉及氮哌酮及其代谢物氮哌醇的残留量的测定方法。

背景技术

氮哌酮(Azaperone)是一种丁酰苯类神经松弛剂,肌肉注射后可对动物产生精神性运动镇静作用,使动物变得安静,对环境淡漠。可以用来防止动物的“聚居应激”以及在混群对发生互相攻击和打架,另外,该药也可用来防止心脏过载综合症,消除紧张状态,使猪等动物长期处于安静状态,以便于长途运输,并减少动物死率和体重下降。随着氮哌酮在兽医临床上的应用,其产生的毒副作用还会对人体产生直接的危害,因此氮哌酮在动物性组织中的残留问题已经日益引起人们的关注。为加强兽药残留监控工作,保证动物性食品安全,我国农业部于2002年颁布的235号公告里对氮哌酮在兽医上的使用做了严格规定,规定其残留标示物为原形药物及其代谢物氮哌醇之和,在猪肌肉中的最高残留限量为60μg/kg。在动物性食品中残留过高的该药物,不仅危害我国人民的健康,而且残留该药的动物产品将不能进入欧盟等发达国家的市场。

动物性组织中氮哌酮及其代谢物的残留检测方法报道文献较少。

发明内容

液相色谱一串联质谱法(LC-MS/MS)具有灵敏度高、定性定量准确等优点,本项目拟采用LC-MS/MS方法建立猪肌肉中氮哌酮及其代谢物氮哌醇的残留检测确证方法,为该类药物的残留监控提供了科学依据。

本发明包括以下步骤：

（1）样品预处理准确称取2(±0.05)g试料,置50mL离心管内,加1%甲酸乙腈溶液10mL,涡旋混合30s,中速振荡5min,8000r/min离心10min,取5mL上层清液于玻璃管中,50℃下氮气吹干。残余物用20%甲醇水溶液1.0mL溶解,再加20%甲醇水溶液饱和的正己烷1.0mL,涡旋混合30s,静置分层后,转移下层溶液至1.5mL塑料离心管内,于-4℃下13000r/min离心10min后,吸下层溶液过0.2μm滤膜,供液相色谱-串联质谱仪分析。

(1)上机测定

用超高效液相色谱检测，记录色谱图，内标峰高（Hi）与氮哌酮及其代谢物氮哌醇峰高（Hs），用标准曲线换算浓度。

前述的碱性橙含量的测定方法，其特征在于该方法是以Watesrs BEH C₁₈柱(50x2.1mm,1.7μm);流动相为0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水溶液(18+82,V/V)等度洗脱;柱温为30℃;流速为0.3mL/min;进样量为10μL。质谱条件为:电喷雾离子源(ESI⁺),多反应监测(MRM)方式进行采集；本发明的有益效果是：本发明应用高效液相色谱法检测碱性橙含量具有较好的准确度与精密度。

本发明的有益效果是：本发明应用超高效液相色谱法检测氮哌酮及其代谢物氮哌醇的残留量具有较好的准确度与精密度。

附图说明

图1为5μg/mL混合标准工作液中药物特征离子质量色谱图 。

图2为空白猪肌肉中添加5μg/kg药物得到的特征离子质量色谱图 。

具体实施方式

下面将详细说明本发明的具体实施方式：

1.仪器与试剂：

仪器：

ACQUITY UPLC-Quattro Premier XE^TM质谱联用仪，Waters公司；AE260电子天平，Mettler Toledo公司；Biofuge Strators高速冷冻离心机,贺利氏公司；Organomation Associates氮吹仪，Jnc公司；SIR4漩涡混合器，IKA公司。

试剂：

氮哌酮，氮哌醇，纯度均大于98.0%,购自Dr.Ehrenstorfer EmbH公司;乙睛、甲醇为色谱纯Fisher公司；甲酸为色谱纯;正己烷为分析纯;所用水为超纯水。。

2.方法与结果

对照溶液配制

精密称定氮哌酮和氮哌醇对照品适量,置于不同10mL棕色量瓶中,用甲醇溶解并稀释成浓度为1mg/mL的标准储备液;各取标准储备液适量置同一10mL棕色量瓶中,用甲醇逐步稀释成适宜浓度的混合标准工作液。

色谱条件

色谱柱为BEHC₁₈色谱柱(50mmx2.lmm,1.7μm);流动相为0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水溶液(18+82,V/V),等度洗脱;流速.03mL/min,柱温30℃,进样量10μL。

质谱条件