[发明专利]一种用磁性固定化PLA1限制性酶解大豆毛油的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种油脂加工工艺领域，具体涉及一种用磁性固定化PLA₁限制性酶解大豆毛油的方法。

背景技术：

大豆毛油中除含有大量水化磷脂外，还存在非水化磷脂，这些磷脂的存在会影响成品油脂的质量，因此需要对毛油中磷脂进行脱除，将毛油中磷脂脱除这一过程称为毛油脱胶。磷脂中水化磷脂亲水性好，易水化脱除；而非水化磷脂亲水性较差，不易水化脱除，需采用酸法、酶法及特殊方法等脱除。但在实际生产中，存在着磷脂酶价格高而利用率低、不易回收、活性不易控制，同时在PLA₁酶解过程中，酶解产物Sn-2-HPA会发生酰基转移生成Sn-1-HPA，随着反应时间延长酶解效率降低，成品油脂质量因游离脂肪酸(FFA)含量增高而降低等问题，给工业化生产增加了难度。

在酸性条件下，氢离子能够进攻羰基上的氧原子，形成质子化的羰基氧，Sn-1位上的羟基氧的孤对电子进攻质子化的羰基碳正离子形成五元环中间体，断裂后可形成Sn-1-HPA；在碱性条件下是氢氧根负离子进攻Sn-1位上的羟基氢，并使其带负电，随后进攻羰基碳正离子形成五元环中间体，断裂后可形成Sn-1-HPA，因五元环中间体能量高而结构不稳定，使得五元环断裂，引起Sn-2-HPA上的脂肪酸酰基从Sn-2位上转移到Sn-1位上，发生酰基转移生成Sn-1-HPA，其结构Sn-1中又出现了脂肪酸酰基，随着Sn-1-HPA产物的生成，磷脂酶A₁再次发生酶解作用，引起油脂中游离脂肪酸含量升高，酶解效率降低。

采用两性氢氧化物考察其对提高酰基稳定性的影响，硼酸(H₃BO₃)抑制Sn-2-HPA酰基转移，产物Sn-2-HPA中Sn-1位上具有羟基氧孤对电子，该孤对电子比较活跃，是影响Sn-2-HPA稳定的关键因素。利用H₃BO₃上的剩余空轨道，使其能与孤对电子形成配位键，从而抑制氧负离子的形成，阻断五元环中间体的产生，进而提高Sn-2-HPA的稳定性，抑制酶解产物Sn-2-HPA的酰基转移。因此，抑制剂的加入能够有效阻断五元环中间体的形成途径，抑制酶解产物Sn-2-HPA发生酰基转移，实现限制性酶解工艺。

发明内容

本发明是将制成磁性固定化酶PLA₁应用于大豆水化脱胶毛油的脱胶限制性酶解过程中，发现通过抑制剂(H₃AlO₃、H₂ZnO₂和H₃BO₃)上的空轨道与Sn-2-HPA上羟基氧的孤对电子形成配位键，阻断五元环中间体形成，抑制酰基转移来保证Sn-2-HPA的稳定性，采用限制性酶解工艺，降低底物中磷含量和游离脂肪酸含量。

具体实施方式

具体实施方式一：一种用磁性固定化PLA₁限制性酶解大豆毛油的方法通过以下步骤实现：步骤一、在一定温度下100g大豆水化毛油中加入1.60～2.60％(w/w)的硼酸，磁性固定化PLA₁添加量为0.04～0.12g/kg，在40～65℃条件下加入20mL/kg热水，以75r/min搅拌，用4％(w/w)NaOH调节pH至4.50～7.00，脱胶反应时间2.0～7.0h，结束后离心进行分离，取上层油样测试磷含量和游离脂肪酸含量，实现非水化磷脂的限制性酶解。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点在于步骤一中硼酸添加量2.00％、2.20％、2.40％(w/w)，测定毛油中磷含量和游离脂肪酸含量。其它步骤与具体实施方式一相同。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一的不同点在于步骤一中磁性固定化PLA₁添加量0.08、0.10、0.12g/kg，测定毛油中磷含量和游离脂肪酸含量。其它步骤与具体实施方式一相同。

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一的不同点在于步骤一中反应温度55、60、65℃，测定毛油中磷含量和游离脂肪酸含量。其它步骤与具体实施方式一相同。

具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一的不同点在于步骤一中pH5.5、6.0、6.5，测定毛油中磷含量和游离脂肪酸含量。其它步骤与具体实施方式一相同。

具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一的不同点在于步骤一中反应时间3.0、4.0、5.0h，测定毛油中磷含量和游离脂肪酸含量。其它步骤与具体实施方式一相同。