[发明专利]使用miRNA检测体内细胞死亡情况的方法

说明书

本发明描述通过测量遍在和组织特异miRNA的水平检测体内细胞死亡的非介入性方法。该方法可用于检测细胞死亡伴随或引起的病理以及诊断感染性疾病；由不同理化因子诱导的细胞毒作用和特定的胎儿异常的存在情况。

本申请是分案申请，原申请的申请日为2008年8月22日，申请号为200880113585.0(PCT/US2008/009991)，发明名称为“使用miRNA检测体内细胞死亡情况的方法”。

相关申请

该申请要求于2007年8月22日提交的U.S.临时申请第60/965,871号的利益，其全部内容通过引用结合到本文中。

发明领域

本发明提供了分离和检测体液中脱细胞小RNA特别是微小RNA(miRNA)序列的非介入性的方法。更具体地说，本发明涵盖通过分析尿液和其它体液中miRNA的水平(用于临床诊断和治疗监测)检测体内细胞死亡情况的方法。

发明背景

细胞死亡是多细胞生物体发育和机能的正常部分。作为自然过程，细胞死亡涉及许多由内部因素引起的疾病的病理学。细胞死亡还伴随着由外部的物理、化学、生物试剂引起的疾病的发生。

存在两种主要类型的细胞死亡：坏死和凋亡，它们表现出不同的形态特性和分子特性(Kerr等,Br.J.Cancer.26,239-257(1972)；Umansky,Theor.Biol.97,591-602(1982)；Umansky等,Adv Pharmacol.41,383-407(1997)；Ameisen,Cell Death Differ.11,4-10(2004)；Lockshin等.Int J Biochem Cell Biol.36,2405-19(2004)；G.Kroemer,等,CellDeath and Differentiation 12,1463-1467(2005))。坏死被认为直接由严重的分子和/或结构损害的引起的灾难性代谢失效，并导致炎症和对周围细胞的继发性损害。凋亡是比坏死普遍得多的生物学现象，可由特定信号如激素、细胞因子；由特定信号如生长或粘附因子的缺乏或由不造成灾难性地失去完整性的分子损伤所诱导。凋亡是积极的细胞应答的结果，后者涉及分子事件有序和特定级联的开始。凋亡导致各种现象的出现：染色质浓缩和边缘化、核碎裂、细胞萎缩、胞膜起泡和核DNA的酶促核小体间断裂(enzymaticinternucleosomal fragmentation)(Umansky等，Biochim Biophys Acta.655，9-17(1981)；Arends等，Am J Pathol.136，593-608(1990))。还有文献描述以特定形态学为特点的其它更罕见的细胞死亡模式，例如所谓的自体吞噬细胞死亡(Bredesen等，Stroke.38(2Suppl)：652-660(2007)。

无论细胞死亡的特定机制和类型如何，检测死亡细胞类型的方法对于各种疾病的诊断是重要的，对于疾病和治疗监测是关键的，对于不同的诊断是有帮助的。此外，能够检测体内特定细胞死亡的方法对于开发预防或诱导细胞死亡的药物以及对于新开发药物细胞毒性的分析是有用的。