[发明专利]一种镰刀形细胞性贫血症的基因检测引物及其组合物

权利要求书

1.一种镰刀形细胞性贫血症的基因检测引物，其特征在于：包括以下引物：

5′-GTCGACTGTTGCTTACACTTTC-3′(SEQIDNo.1，以下简称F3)

5′-GCCCAGTTTCCATTTGCCT-3′(SEQIDNo.2，以下简称B3)

5′-TCTGGAGTCAGATGCACCATTCTGACATAACAGTGTTCACTAGC-3′(SEQIDNo.3，以下简称FIPA)

5′-ACTGGAGTCAGATGCACCATTCTGACATAACAGTGTTCACTAGC-3′(SEQIDNo.4，以下简称FIPT)

5′-TGAACGTGGATGCAGTTGGTGGGAGCCTCTCTTATAACCTTGATACC-3′(SEQIDNo.5，以下简称BIP)。

2.一种镰刀形细胞性贫血症的基因检测组合物，包括权利要求1中所述的引物，其特征在于：还包括dNTP、缓冲液、Bst聚合酶和超纯水。

3.根据权利要求2所述的镰刀形细胞性贫血症的基因检测组合物，其特征在于：所述组合物分为两个体系，分别记为体系A和体系T；

体系A中包括F3、B3、FIPA、BIP、dNTP、缓冲液、Bst聚合酶和超纯水；

体系T中包括F3、B3、FIPT、BIP、dNTP、缓冲液、Bst聚合酶和超纯水。

4.根据权利要求3所述的镰刀形细胞性贫血症的基因检测组合物，其特征在于：两个体系中均还包括用于显示体系颜色的指示剂。

5.根据权利要求4所述的镰刀形细胞性贫血症的基因检测组合物，其特征在于：所述指示剂为钙黄绿素和氯化锰的组合物或者为羟基萘酚蓝。

6.根据权利要求5所述的镰刀形细胞性贫血症的基因检测组合物，其特征在于：指示剂在体系A和体系T中的浓度相同；

若指示剂为钙黄绿素和氯化锰的组合物，钙黄绿素为25μM，氯化锰为0.5mM；

若指示剂为羟基萘酚蓝，其为120μM。

7.根据权利要求3所述的镰刀形细胞性贫血症的基因检测组合物，其特征在于：所述两个体系中均还包括添加剂，所述添加剂在两体系中的浓度一致；

所述添加剂为甜菜碱或二甲基亚砜中的一种；若添加剂为甜菜碱，其浓度大于0，小于等于1M；若为二甲基亚砜，其浓度为大于0，小于等于10％(体积分数)。

8.根据权利要求7所述的镰刀形细胞性贫血症的基因检测组合物，其特征在于：所述甜菜碱的浓度为0.8M。

9.根据权利要求3-8任一所述的镰刀形细胞性贫血症的基因检测组合物，其特征在于：所述两个体系中：F3的浓度相同，为0.4μM；B3的浓度相同，为0.4μM；BIP的浓度相同，为1.6μM；体系A中FIPA的浓度和体系T中FIPT的浓度相同，均为1.6μM。

10.根据权利要求3-8任一所述的镰刀形细胞性贫血症的基因检测组合物，其特征在于：所述两个体系中缓冲液的浓度相同，其包括：Tris-HCl20mM，KCl50mM，(NH4)₂SO₄10mM，MgSO₄4mM，Tween-200.1％(体积分数)。

11.根据权利要求3-8任一所述的镰刀形细胞性贫血症的基因检测组合物，其特征在于：两个体系中dNTP的浓度相同，均为1.4mM；两个体系中Bst聚合酶均为8U。

12.一种镰刀形细胞性贫血症的基因检测方法，使用权利要求3-11任一所述的镰刀形细胞性贫血症的基因检测组合物，其特征在于：将待检测的核酸分别加入到体系A和体系T中，得到的两个反应体系于55～70℃下反应，反应结束后观察体系的变化。

13.根据权利要求12所述的镰刀形细胞性贫血症的基因检测方法，其特征在于：所述待检测的核酸在两个体系中的浓度一致，均为0.8～4ng/μL。

14.根据权利要求12或13所述的镰刀形细胞性贫血症的基因检测方法，其特征在于：反应结束后，将两个体系分别进行灭活处理。

15.根据权利要求12或13所述的镰刀形细胞性贫血症的基因检测方法，其特征在于：反应温度为60℃。

16.根据权利要求12或13所述的镰刀形细胞性贫血症的基因检测方法，其特征在于：所述反应时间为40～120min。