[发明专利]一种抗化脓隐秘杆菌PLO蛋白单克隆抗体及其识别的抗原表位和应用

说明书

本发明公开了一种抗化脓隐秘杆菌PLO蛋白单克隆抗体及其识别的抗原表位和应用。本发明的一种抗化脓隐秘杆菌PLO蛋白单克隆抗体，由保藏编号为CGMCC NO.11188的杂交瘤细胞株或保藏编号为CGMCC NO.11189的杂交瘤细胞株分泌产生，该单克隆抗体对化脓隐秘杆菌PLO蛋白具有反应特异性，是针对化脓隐秘杆菌PLO蛋白的特异性的两株抗体。本发明还提供了与所述单克隆抗体特异性结合的抗原表位多肽。本发明的技术方案对PLO生物活性的研究及相关疫苗和治疗手段的开发具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种单克隆抗体及其识别的抗原表位和应用，具体涉及一种抗化脓隐秘杆菌PLO蛋白(溶血素蛋白)单克隆抗体、产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，本发明还涉及上述单克隆抗体所识别的抗原表位多肽。本发明属于生物技术领域。

背景技术

化脓隐秘杆菌原称化脓棒状杆菌(Corynebacteriumpyogenes)、化脓放线菌(Actinomycespyogenes)，1997年定名为化脓隐秘杆菌(Arcanobacteriumpyogenes)，后更名为Trueperellapyogenes。化脓隐秘杆菌(T.pyogenes)是经济型家畜(牛、羊、猪等)黏膜上的一种共生菌，主要寄生于动物呼吸道、消化道和泌尿生殖道中，为正常菌群的组成部分。同时，化脓隐秘杆菌也是一种条件性致病菌，是其所在菌属中毒力最强的细菌，可经皮肤、黏膜破损处入侵引起临近的组织、器官感染，也可由于吸入肺部引起肺和胸部隐秘杆菌病，表现为肺炎、子宫内膜炎、乳腺炎、心内膜炎、关节炎、皮下脓肿等。溶血素(Pyolysin，PLO)蛋白由化脓隐秘杆菌(T.pyogenes)表达，是T.pyogenes分泌的唯一一种溶血素，是T.pyogenes主要毒力因子之一。1997年，Billington等从野生型菌株中克隆得到了plo基因，获得其全基因序列。据了解plo基因由1602个核苷酸编码534个氨基酸(前27个氨基酸构成信号肽)，PLO蛋白成熟体分子量为57.9kDa，共分为4个结构域(D1～4)。氨基酸序列分析表明，PLO属于胆固醇依赖性溶细胞素(Cholesterol dpendentcytolysin，CDC)家族成员，该家族其他成员还包括单核增生李斯特氏菌溶血素(listeriolysin，LLO)、肺炎链球菌溶血素(pneumolysin，PLY)、中间链球菌溶血素(intermedilysin，ILY)、猪链球菌溶血素(suilysin，SLY)、链球菌溶血素O(streptolysin O，SLO)和产气荚膜梭菌溶素O(perfringolysin O，PFO)等，家族成员的分子结构具有很高的相似性。该家族成员可以通过与细胞膜上胆固醇结合(ILY与人细胞膜上CD59结合)，在真核细胞的细胞膜上形成穿膜孔道，产生广泛性的溶细胞效应。PLO能够裂解多种动物的免疫细胞和红细胞，将其编码基因(plo)敲除或将其替换为编码无溶血活性PLO突变体的编码基因，导致T.pyogenes毒力的显著降低，而且T.pyogenes感染对小鼠的致死率与PLO分泌水平呈正相关。因此，研究PLO蛋白的功能对开发化脓隐秘杆菌防控手段具有重要价值。特异性单抗是研究蛋白质功能的重要工具之一，本专利旨在提供一种抗化脓隐秘杆菌PLO蛋白单克隆抗体、产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并申请保护。本发明通过原核表达系统获得重组PLO蛋白，接着应用杂交瘤技术生产单抗，并采用基因截短技术以及Wesren-Blot方法确定特异性单抗的抗原表位。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种抗化脓隐秘杆菌PLO蛋白单克隆抗体，所述的单克隆抗体由保藏编号为CGMCC NO.11188的杂交瘤细胞株或保藏编号为CGMCC NO.11189的杂交瘤细胞株分泌产生；

本发明的目的之二是提供产生所述单克隆抗体的杂交瘤细胞株；

本发明的目的之三是提供与所述单克隆抗体特异性结合的抗原表位多肽；

本发明的目的之四是提供所述单克隆抗体以及与单克隆抗体特异性结合的抗原表位多肽的用途。

为了达到以上目的，本发明所采用的技术方案为：