[发明专利]一种脂质体核酸疫苗佐剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及核酸疫苗领域，尤其涉及一种脂质体核酸疫苗佐剂及其制备方法和在预防和免疫治疗疫苗领域的应用。

背景技术

目前，传染性疾病(如艾滋病、非典型肺炎等)或某些慢性疾病(如肿瘤等)的发生、流行严重地威胁着人类的健康和社会的稳定。疫苗(一类具有生物活性的制品)是目前人类可以控制某一传染性疾病的唯一武器，预防接种不但保护了机体免受传染病病原体的侵袭，而且在群体中也限制了病原微生物的传播。

传统由减毒或灭活的病原微生物制得的、具有刺激机体产生针对病原微生物的特异抗体/细胞免疫的减毒疫苗或灭活疫苗，虽然有效地控制了许多传染病，但是这些疫苗仍然存在一定的缺陷，如：(1)减毒活疫苗能够刺激机体产生体液免疫，还能产生细胞免疫。与灭活疫苗(死疫苗)相比，这类疫苗免疫力强、作用时间长，但存在因减毒不彻底而导致的感染的风险，具有潜在的致病危险(有可能因发生逆行突变而在人体内恢复毒力)；(2)灭活疫苗一般只能刺激机体产生抗病毒外膜蛋白的循环性抗体IgM和IgG，表现了一定程度的保护力，但由于所提供的免疫力较短暂，为完成全程免疫，往往需要多次接种，因而可能出现过敏反应。

鉴于上述问题，核酸疫苗倍受青睐。核酸疫苗是近年发展的一种核酸介导的免疫接种疫苗，其本质是含有病原体抗原基因的真核表达载体，当其被导入机体后，可被机体细胞所摄取并表达病原体的抗原蛋白，从而诱发机体对该蛋白的免疫反应。随着导入途径和部位的不同可引发全身或局部的免疫反应。在全身性的免疫应答反应中，既可激活体液免疫，也可诱发细胞免疫。与传统疫苗相比，核酸疫苗具有一定的优势，然而，实验发现，DNA疫苗易被DNA酶、溶酶体降解破坏，无法有效表达，故只能产生微弱的体液和细胞免疫。因此，为了提高DNA疫苗的免疫应答，有必要构建一种理想的载体，与DNA疫苗共同导入机体。

脂质体具有类细胞结构，进入体内主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封物质的体内分布；脂质体既无毒性也无免疫原性且在体内可生物降解，不会发生载体材料体内积累而引发的毒性反应。

阳离子脂质体虽然能够通过带正电的阳离子脂质和带负电的核酸分子间的静电作用相复合，有效携载核酸分子；然而，其存在以下两个困难：(1)核酸疫苗需要在细胞核中才能发挥作用，而阳离子脂质体核酸体系进入细胞后无法有效地从内含体中逃逸，因而无法进入细胞核，最终导致免疫应答弱或者无免疫应答；(2)阳离子脂质体核酸体系缺乏靶向性，不能富集在目标释放位点，因而有效输递率低，免疫应答弱。

近年来，阳离子脂质体在核酸疫苗的研制中已引起广泛的关注，探索高效内吞、有效内含体逃逸、靶向性好的核酸疫苗体系可能是疫苗研发的一条有效途径。如何研发一种新型脂质体核酸疫苗体系，其能够使其靶向进入目标细胞、提高核酸体系的细胞内吞，增强内含体逃逸性能，促进核酸分子的高效释放，显著增强机体的免疫应答是目前亟待解决的问题。

发明内容

为解决现有技术中的不足，本发明提供了一种脂质体核酸疫苗佐剂及其制备方法和应用，特别是提供了一种用于提高核酸疫苗体系的靶向性、抗原表达能力以及免疫应答的脂质体核酸疫苗佐剂及其制备方法和在预防和免疫治疗疫苗领域的应用。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种脂质体核酸疫苗佐剂，其是由阳离子脂质、辅助脂质、聚羧基三甲胺乙内酯中性脂质和靶向分子修饰的聚羧基三甲胺乙内酯脂质组成。特别是提供了一种具有提高核酸抗原提呈能力、增强免疫应答作用的脂质体核酸疫苗佐剂剂型。

本发明的脂质体核酸疫苗佐剂中，靶向分子修饰的聚羧基三甲胺乙内酯脂质有利于体系靶向免疫细胞；阳离子脂质通过静电作用负载核酸疫苗；聚羧基三甲胺乙内酯中性脂质保护核酸免于降解，并有利于核酸疫苗从免疫细胞的内涵体逃逸出来进入细胞核进行表达，提高核酸疫苗的提呈效率，诱导细胞免疫和体液免疫，同时刺激抗原提呈细胞产生免疫细胞因子，产生佐剂效果，辅助增强免疫应答作用。

本发明中，所述的聚羧基三甲胺乙内酯中性脂质为1，2-十八酰基-sn-甘油-聚羧基三甲胺乙内酯(DG-PCBn)、胆固醇-聚羧基三甲胺乙内酯(DC-PCBn)、1，2-油酰基磷脂酰乙醇胺-聚羧基三甲胺乙内酯(DOPE-PCBn)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚羧基三甲胺乙内酯(DSPE-PCBn)或α-十六烷基丙三醇醚-聚羧基三甲胺乙内酯(HG-PCBn)中的任意一种或至少两种的混合物。