[发明专利]一种脂质体核酸疫苗佐剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种脂质体核酸疫苗佐剂，其特征在于，其由阳离子脂质、辅助脂质、聚羧基三甲胺乙内酯中性脂质和靶向分子修饰的聚羧基三甲胺乙内酯脂质组成。

2.如权利要求1所述的脂质体核酸疫苗佐剂，其特征在于，所述聚羧基三甲胺乙内酯中性脂质为1，2-十八酰基-sn-甘油-聚羧基三甲胺乙内酯、胆固醇-聚羧基三甲胺乙内酯、1，2-油酰基磷脂酰乙醇胺-聚羧基三甲胺乙内酯、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚羧基三甲胺乙内酯或α-十六烷基丙三醇醚-聚羧基三甲胺乙内酯中的任意一种或至少两种的混合物；优选为1，2-十八酰基-sn-甘油-聚羧基三甲胺乙内酯、1，2-油酰基磷脂酰乙醇胺-聚羧基三甲胺乙内酯或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚羧基三甲胺乙内酯中的任意一种或至少两种的混合物；

优选地，所述聚羧基三甲胺乙内酯中性脂质的聚合度n为1～200之间任意整数，优选为1～100之间任意整数，进一步优选为5～50之间任意整数，更优选为10～35之间任意整数。

3.如权利要求1或2所述的脂质体核酸疫苗佐剂，其特征在于，所述阳离子脂质为(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵、双十八烷基二甲基溴化铵、N-[1-(2,3-二油酰氯)丙基]-N,N,N-氯化三甲胺、精胺-5-羧基-氨基乙酸二十八烷基-酰胺、双油基双甲基氯化铵、N-(N’,N’-二甲基胺乙基)胺基丙酰基-胆固醇、N,N-二甲基-N-羟乙基-N-(1,2-双十四烷氧基)丙基溴化铵、1,2-二亚油氧基-N,N-二甲基丙胺、1,2-二亚麻氧基-N,N-二甲基丙胺或二硬脂基二甲基铵盐中的任意一种或至少两种的混合物；优选为(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵和/或N-[1-(2,3-二油酰氯)丙基]-N,N,N-氯化三甲胺；

优选地，所述辅助脂质为胆固醇、1,2-油酰基磷脂酰乙醇胺或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺中的任意一种或至少两种的混合物；优选为胆固醇；

优选地，所述靶向分子修饰的聚羧基三甲胺乙内酯脂质中的靶向分子为抗体类、小分子类或适配体类中的任意一种或至少两种的混合物；优选为小分子类；进一步优选为糖类、肽类、生长因子或维生素类中的任意一种或至少两种的混合物；更优选为叶酸分子、甘露糖分子、RGD分子、乳铁蛋白分子或转铁蛋白分子中的任意一种或至少两种的混合物，最优选为甘露糖分子。

4.如权利要求1-3任一项所述的脂质体核酸疫苗佐剂，其特征在于，所述阳离子脂质:辅助脂质:(聚羧基三甲胺乙内酯中性脂质与靶向分子修饰的聚羧基三甲胺乙内酯脂质的混合物)三者的摩尔比为1:1:x，其中x＝0.01～0.99，优选为0.1～0.8，更优选为0.2～0.6；

优选地，所述靶向分子修饰的聚羧基三甲胺乙内酯脂质:(聚羧基三甲胺乙内酯中性脂质与靶向分子修饰的聚羧基三甲胺乙内酯脂质的混合物)的摩尔比为1％～60％，优选为5％～50％，进一步优选为10％～30％。

5.如权利要求1-4任一项所述的脂质体核酸疫苗佐剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法为注入法、薄膜分散法、超声波分散法、反相蒸发法、高压乳匀法、冷冻干燥法、冻融法或超临界法中的任意一种或至少两种的组合；优选为注入法、薄膜分散法或超声波分散法中的任意一种或至少两种的混合物，进一步优选为薄膜分散法。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述薄膜分散法包括如下步骤：

(1)将阳离子脂质、辅助脂质、聚羧基三甲胺乙内酯中性脂质和靶向分子修饰的聚羧基三甲胺乙内酯脂质分别溶于有机溶剂中，充分溶解；

(2)将步骤(1)中的各溶液混合，采用减压旋蒸法去除有机溶剂，形成油膜；

(3)进一步去除残留的有机溶剂，将所形成的油膜干燥；

(4)向步骤(3)得到的油膜中加入分散溶液，水浴超声，形成脂质体悬液；

(5)将步骤(4)中得到的脂质体悬液进行高压均质和/或进行高压挤出，形成粒径均匀的脂质体核酸疫苗佐剂。