[发明专利]一种检测稻瘟菌效应蛋白从水稻根部转移至叶缘的方法在审
| 申请号： | 201510602926.2 | 申请日： | 2015-09-21 |
| 公开（公告）号： | CN105181965A | 公开（公告）日： | 2015-12-23 |
| 发明（设计）人： | 杨静;李成云;鄢进陆;杨亚琼;刘林 | 申请（专利权）人： | 云南农业大学 |
| 主分类号： | G01N33/569 | 分类号： | G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 650000 云南*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 稻瘟菌 效应 蛋白 水稻 根部 转移 至叶缘 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种检测稻瘟菌效应蛋白从水稻根部转移至叶缘的方法，其特征在于：它将稻瘟病菌效应蛋白基因表达产物于4℃离心机离心收集菌体，用新鲜配制的缓冲液悬浮菌体，在冰水浴上进行超生破碎细胞后离心收集上清，将该原核表达产物，利用GST纯化柱纯化，将纯化后的表达产物按照5.0mg/ml的浓度处理感病水稻品种丽江新团黑谷的根尖0.5cm处6h，灭菌水漂洗4h，将处理后的水稻植株的叶片进行石蜡切片，用免疫细胞化学方法处理水稻叶片切片，共聚焦显微镜观察根尖皮层细胞微管骨架。
2.根据权利要求1所述的一种检测稻瘟菌效应蛋白从水稻根部转移至叶缘的方法，其特征在于：所述免疫细胞化学方法处理方法为：将大豆根尖放入固定液抽气10min，室温固定1hr；固定完毕后用PEMT洗三次，每次10min；37℃条件下酶解1hr；酶解后PEM冲洗三次,每次10min；用0.1MPBS（pH7.2）溶液配制NaBH4，使其浓度为1mg/ml处理大豆根尖20min；室温用50mMGly封闭30min；加一抗，4℃过夜，冲洗一抗：PBS冲洗三次,每次10min；加二抗（1:600）,37℃、闭光条件下,3hr；冲洗二抗：PBS冲洗三次,每次10min；加上抗荧光淬灭剂后，封片。
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