[发明专利]骨髓间充质干细胞的诱导方法及其诱导液

权利要求书

1.一种骨髓间充质干细胞的诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：

获取骨髓间充质干细胞进行体外培养；

在体外培养过程中用诱导液进行诱导反应；

其中，所述诱导液包括血管紧张素II和骨形态发生蛋白-2。

2.根据权利要求1所述的骨髓间充质干细胞的诱导方法，其特征在于，所述血管紧张素II的浓度为1-5μmol/L，骨形态发生蛋白-2的浓度为50-200μg/L。

3.根据权利要求1或2所述的骨髓间充质干细胞的诱导方法，其特征在于，获取骨髓间充质干细胞的方法步骤包括：

抽取人骨髓，在含有DMEM的离心管中混合，再过筛，得到细胞悬液，再将所述细胞悬液加入到含Percoll分层液的离心管中，离心，获取单个核细胞。

4.根据权利要求3所述的骨髓间充质干细胞的诱导方法，其特征在于，所述Percoll分层液的密度为1.067-1.082kg/L。

5.根据权利要求3所述的骨髓间充质干细胞的诱导方法，其特征在于，获取骨髓间充质干细胞的方法步骤还包括：在获取单个核细胞后，用含有胎牛血清、青霉素和/或链霉素的DMEM对单个核细胞进行培养，再于CO₂培养箱中孵育，36-96个小时后更换培养基，除去未贴壁的细胞，以后每2-4天换液1次，直到单个核细胞增殖达到融合状态，即获得纯化后的原代骨髓间充质干细胞。

6.根据权利要求5所述的骨髓间充质干细胞的诱导方法，其特征在于，所述DMEM培养基中，胎牛血清的浓度为180-120mg/L，青霉素的浓度为90-110ug/ml，和/或链霉素的浓度为90-110ug/ml。

7.根据权利要求5所述的骨髓间充质干细胞的诱导方法，其特征在于，用所述诱导液进行诱导反应之前，还包括对原代骨髓间充质干细胞进行传代培养的过程，包括以下步骤：

S21、用1.5～3mL/L胰蛋白酶将原代骨髓间充质干细胞消化分离，再用完全培养基中止消化，制成细胞悬液；然后传代接种于含新生牛血清的DMEM培养瓶中培养，隔1～3天换液，直至细胞达到90％以上融合；

S22、重复步骤S21继续传代至第4代骨髓间充质干细胞后，用胰蛋白酶消化制成细胞悬液，再用PBS冲洗后，以0.5～1.5×10⁵个/ml的密度接种于多孔板上，培养2-5天。

8.根据权利要求7所述的骨髓间充质干细胞的诱导方法，其特征在于，用所述诱导液对第4代骨髓间充质干细胞进行诱导反应，包括以下步骤：

利用所述诱导液诱导分化12-36个小时，吸弃诱导液，再用PBS清洗3次，继续用完全培养基培养，每2-5天换液一次，继续培养1-4周。

9.根据权利要求7所述的骨髓间充质干细胞的诱导方法，其特征在于，所述多孔板中内置涂有多聚赖氨酸的盖玻片。

10.一种诱导液，用于诱导分化骨髓间充质干细胞，其特征在于，包括浓度为1-5μmol/L的血管紧张素II，和浓度为50-200μg/L的骨形态发生蛋白-2。