[发明专利]彩色‑荧光双功能免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种彩色-荧光双功能免疫层析试纸条及其制备方法。

背景技术

在免疫层析检测领域，目前有两种主流的检测方式：一种是通过肉眼判读的定性检测免疫层析试纸条，包括胶体金标记试纸条、彩色乳胶标记试纸条等，其优点是无需配置任何检测设备即可对样品中待测物的含量做出定性的判断，缺点是无法定量，不能提供准确的浓度数据，且其检测灵敏度偏低，一般只能检出浓度在ng/ml级别以上的待测物；另一种是通过仪器判读的荧光免疫层析试纸条，其优点是通过仪器判读数据，可提供准确的浓度数据，且检测灵敏度比胶体金或彩色乳胶标记的试纸条要高2-3个数量级，但其缺点是在没有读数仪的情况下完全无法获得待测物的含量浓度情况。

发明内容

本发明主要提供了一种彩色-荧光双功能免疫层析试纸条及其制备方法，其检测结果既可通过肉眼进行阴阳性初步定性判断，又可通过仪器分析，获得准确的检测数据。

一种彩色-荧光双功能免疫层析试纸条，包括底板，底板的一面上顺序设有添加待测样品的加样垫、标记物结合垫、设有检测线T线和质控线C线的检测垫和提供毛细管虹吸动力的吸水垫，相邻各垫依次搭接，标记物结合垫上涂覆有彩色-荧光双功能微球标记物探针。

优选的，所述彩色-荧光双功能微球标记物探针含有待测物抗体彩色-荧光双功能微球标记物和兔、鼠或其他与待测物抗原抗体无交叉反应的抗原抗体彩色-荧光双功能微球标记物，待测物抗体彩色-荧光微球标记物由与待测物相关的抗原抗体或配体受体和彩色-荧光双功能微球结合制备而成，兔、鼠或其他与待测物抗原抗体无交叉反应的抗原抗体彩色-荧光双功能微球标记物由兔、鼠或其他与待测物抗原抗体无交叉反应的抗原抗体和彩色-荧光双功能微球结合制备而成。

优选的，所述检测线T线包被有与待测物相关的抗原抗体或配体受体，质控线C线包被有与待测物无关的抗原抗体或配体受体。

优选的，所述彩色-荧光双功能微球的粒径为50-1000nm，彩色-荧光双功能微球的材质为聚苯乙烯微球、聚甲基丙烯酸甲酯微球、聚乙烯吡啶微球、聚乙基丙烯酸甲酯微球、脂质微球和二氧化硅微球中的一种，所述彩色-荧光双功能微球表面带有羧基、氨基、醛基、溴乙酰基、碘乙酰基、硫醇基和环氧基中的一种或多种或不带基团。

优选的，所述彩色-荧光双功能微球的颜色为红色、蓝色、绿色、紫色和黑色中的一种肉眼可见的深色；荧光是稀土螯合物荧光、量子点荧光和普通荧光中的一种；颜色发射的波长和荧光物质发射的波长差大于等于30nm。

优选的，所述加样垫为具有过滤作用的材质，加样垫的材质为玻璃纤维、聚酯膜、海绵、滤纸或经过添加有表面活性剂、糖类、蛋白类、高分子多聚物、盐类中的一种或多种的磷酸缓冲液或Tris-HCl缓冲液浸泡预处理后的玻璃纤维、聚酯膜、海绵、滤纸；

优选的，所述标记物结合垫的材质为玻璃纤维、聚酯膜或经过添加有表面活性剂、糖类、蛋白类、高分子多聚物、盐类中的一种或多种的磷酸缓冲液或三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl缓冲液)浸泡预处理后的玻璃纤维或聚酯膜；

优选的，所述检测垫为具有强疏水特性的多孔材料，检测垫的材质为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜，T线和C线至少为一条。

一种彩色-荧光双功能免疫层析试纸条的制备方法，包括以下步骤：

(Ⅰ)加样垫的制备

用含有乙二胺四乙酸(EDTA)、吐温20(tween-20)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和牛血清白蛋白(BSA)的磷酸缓冲液(PBS缓冲液)浸泡玻璃纤维、聚酯膜、海绵或滤纸，然后置于烘箱中烘干，密封干燥保存备用；

(Ⅱ)标记物结合垫的制备

用含有海藻糖、牛血清白蛋白、tween-20和PVP的PBS缓冲液浸泡玻璃纤维或聚酯膜，然后置于烘箱中烘干，再将彩色-荧光双功能微球标记物探针喷涂于处理烘干后的玻璃纤维或聚酯膜上，再次置于烘箱中烘干，密封干燥保存备用；

(Ⅲ)检测垫的制备

检测线T线的包被：将与待测物相关的抗原抗体或配体受体与用含有海藻糖和十二烷基硫酸钠(SDS)的PBS缓冲液溶解，制得喷涂液一，将喷涂液一喷涂在距检测垫左端12mm处形成检测线T线；

质控线C线的包被：将与待测物无关的抗原抗体或配体受体用含有海藻糖和SDS的磷酸缓冲液溶解，制得喷涂液二，将喷涂液二喷涂在距检测垫左端18mm处形成检测线T线；

将喷涂好的检测垫干燥保存备用；

(Ⅳ)试纸条的组装